人免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELIS

流式细胞表面染色步骤

一、样本准备 详见流式细胞术样本制备技术、流式实验样本制备方法及注意事项 收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300 g 离心 5 min，弃上清 向细胞中加入适量细胞染色 buffer（或含 1%BSA 的 PBS），用移液枪轻轻吹打细胞重悬 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL 三、设置实验分组 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗能和 FcγR

细胞内细胞因子染色步骤

能和 FcγR Ⅲ/Ⅱ结合，封闭非特异性染色，使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。加入 0.5-1μg 纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体，室温孵育 10min。 对于人和大鼠，可直接使用过量的与荧光抗体相同来源和亚型的纯化 Ig 或者与目标种属相同来源血清进行阻断，或者用商业化的 Fc 受体阻断剂。 五、细胞表面抗体孵育 根据实验设计，除空白对照外，对应的单染管、全染管加入相应的抗体 5μL，混匀，4℃ 避光孵育 30min。 六、固定破膜 按照说明书稀释固定破膜液。 每管加入

免疫球蛋白分子的超家族

MHC及其相关分子 MHCⅠ类抗原：α链、β2M   MHCⅡ类抗原：α、β链 β2M相关分子：CD1、Qa、TL 免疫球蛋白受体 PolyIgR(pIgR) IgG Fc段受体：FcγRⅠ（CD64）、FcγRⅡ、FcγRⅢ（CD16） Ige Fc段受体：FcεRIα链