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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Hieff ® Smearase
- 保质期:
有效期1年
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
8T
Hieff ® Smearase 是针对高通量测序平台设计的新一代酶切试剂。本品采用高质量的片段化酶,酶切效果稳定,偏好性 低,可有效降低片段化的时间和成本,摆脱了繁琐的超声步骤,让片段化过程变得更加简单高效。
产品信息
| 货号 |
12907ES08 / 12907ES24 /12907ES96/12907ES98 |
| 规格 |
8 T /24 T /96 T/5000 T |
组分信息
| 组分编号 |
组分名称 |
12907ES08 |
12907ES24 |
12907ES96 |
12907ES98 |
| 12907 |
Hieff ® Smearase |
80 μL |
240 μL |
960 μL |
50 mL |
储存条件
-25~-15℃保存,有效期1年。
注意事项
1. 本试剂盒兼容范围为 1 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高质量 Input DNA。
2. 若 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐,可能会影响后续实验,建议将 DNA 稀释在 ddH2O 或不含 EDTA的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化,EDTA 耐受范围为 0-2 mM。
3. 对于常规的高质量基因组 DNA,酶切时间参考表 1。本试剂盒片段化偏好低,耐受各种 GC 含量的模板。
储存条件
-25~-15℃保存,有效期1年。
注意事项
1. 本试剂盒兼容范围为 1 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高质量 Input DNA。
2. 若 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐,可能会影响后续实验,建议将 DNA 稀释在 ddH2O 或不含 EDTA的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化,EDTA 耐受范围为 0-2 mM。
3. 对于常规的高质量基因组 DNA,酶切时间参考表 1。本试剂盒片段化偏好低,耐受各种 GC 含量的模板。
表 1 常规基因组 DNA 片段化时间推荐表
| 插入片段主峰大小 |
片段化时间 |
优化范围 |
| 600 bp |
5 min |
3-10 min |
| 400 bp |
10 min |
8-15 min |
| 250 bp |
15 min |
10-20 min |
| 200 bp |
20 min |
12-25 min |
| 150 bp |
25 min |
20-30 min |
【注】:以上为推荐时间,需客户在自己的实验体系中进行微调,以达到最佳效果。
4. 参考表 1 片段化时间可将 DNA 酶切为所需大小,为保证优质稳定的片段化效果,片段化过程请于冰上操作。
5. 该酶在高温条件下即可失活。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7. 本产品仅用作科研用途!
使用方法
DNA 片段化(DNA Fragment)
该步骤将基因组 DNA 片段化。
1. 将表 2 中试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。
2. 于冰上配制表 2 反应体系。
表 2 DNA 片段化 PCR 反应体系
| 名称 |
体积(μL) |
| Input DNA |
x |
| Hieff ® Smearase |
10 |
| ddH2O |
Up to 60 μL |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述 PCR 管置于 PCR 仪,设置表 3 所示反应程序,进行 DNA 片段化反应。
表 3 DNA 片段化 PCR 反应程序
| 温度 |
体积(μL) |
| 热盖 105°C |
On |
| 4 °C |
1 min* |
| 30 °C |
3-30 min** |
| 72 °C |
10 min |
| 4 °C |
Hold |
【注】:*DNA 片段化过程为有效控制片段化效果,避免过度酶切,反应程序可预先设置 4℃,待模块温度降至 4℃时,将 PCR 管放入 PCR 仪即可。
**对于完整的基因组 DNA,酶切时间参考表 1。
5. 产物如需纯化,可使用 Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601)或 AMPure XP Beads(Cat#A63880)或其他等效产品。
参考实例
使用 Hieff ® Smearase 对 Human gDNA 样本进行酶切,片段化结果见图 1。

图 1 Hieff ® Smearase 酶切 200 ng Human gDNA 样本(不同酶切时间片段化效果检测)
Ver.CN20240507
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文献和实验[1] Zhang S, Pei Z, Lei C, et al. Detection of cryptic balanced chromosomal rearrangements using high-resolution optical genome mapping [published online ahead of print, 2022 Jun 16]. J Med Genet. 2022;jmedgenet-2022-108553. doi:10.1136/jmedgenet-2022-108553(IF:6.318)
[2] Ren J, Zhang R, Pan C, et al. Prevalence and genotype-phenotype correlations of GBA-related Parkinson disease in a large Chinese cohort. Eur J Neurol. 2022;29(4):1017-1024. doi:10.1111/ene.15230(IF:6.089)
飞的 GeneArt™ Gibson Assembly® 克隆试剂盒系列为例,Gibson Assembly 实际上是生命科学狂人文特尔(就是那个敢单挑 6 国合力的国际人类基因组计划还占尽上风,逼得当时美国总统出面协调让双方合作并同时发表结果的)东山再起后成立的 Venter 研究所旗下 Gibson 博士开发的,里面包含了精心优化搭配的三种酶活性:外切酶会外切双链末端而产生单链 3’突出端,使得外源片段和线性化载体的互补末端能够退火,聚合酶活性会填补退火片段产生的缺口,连接酶活性能够在重组后进行连接。得到
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