NAR新突破：CliPEdit调控RNA功能与m⁶A甲基化，翌圣试剂助力
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
RNA 表观修饰与动态功能调控，正成为解码生命机制、突破疾病研究的核心赛道。N⁶- 甲基腺嘌呤（m⁶A） 作为真核生物 mRNA 最普遍的可逆修饰，其位点特异性、时空精准调控是解析 RNA 生命周期、基因表达与细胞命运的关键。然而传统调控技术多为单向开关（ON或OFF），难以实现多步、可逆、按需调控，极大地限制了m⁶A 动态机制的深入探索。
近日，武汉大学周翔、田沺教授团队在国际 期刊《Nucleic Acids Research》（IF=13.1）上发表了题为“Harnessing a single molecule for dual bioorthogonal regulation of RNA function and m6A methylation” 的突破性研究成果 ——CliPEdit 策略，首次在单一分子上实现生物正交连接（Click OFF）与光控切割（Light ON）的双功能调控，为复杂生物系统中 RNA 多位点动态调控开辟全新路径。
研究团队设计并合成了关键化学试剂 BANEIC（含双叠氮基团与光裂解硝ji苯基团）和 t-DBCO（三价DBCO交联剂），通过三步调控实现 ON → OFF → ON 的RNA功能切换：
Step1. ON 态：BANEIC修饰RNA：使其同时具备—点击化学（click chemistry）可连接性（含叠氮基）、光可裂解性（含硝ji苯基团）。修饰后 gRNA 功能正常，靶向写入 m⁶A；
Step2. OFF态：加入 t‑DBCO，通过 SPAAC 点击反应交联 gRNA，空间位阻使其彻底失活，m⁶A甲基化关闭；
Step3. RE-ON态：365 nm 光照切断光降解基团，移除修饰，gRNA 功能完全恢复，甲基化重启。
图1. CliPEdit策略双正交调控 RNA 甲基化
研究团队设计了系统性的验证实验，充分证明了CliPEdit策略的可靠性。
BANEIC修饰的sg-Gapdh在凝胶中表现出特征性的迁移率降低和条带展宽，t-DBCO处理后，修饰sgRNA发生交联，滞留在凝胶孔中，365 nm光照8分钟后，条带迁移率恢复至接近天然sgRNA水平。
使用FAM标记的R-21nt探针，在HEK293T细胞中实时观察调控过程，BANEIC修饰不影响RNA的细胞内行为；DBCO-Cy5处理后，仅BANEIC修饰的RNA显示Cy5荧光，证明点击反应高效发生；光照后Cy5信号显著减弱，证实光裂解成功。
图2. 介导RNA原位生物正交反应的调制策略验证（活细胞成像）
研究团队靶向多个内源性低甲基化位点：Actb A1216、Gapdh A690、Foxm1 A3488/A3504。
通过优化BANEIC修饰时间（3-7小时）和t-DBCO浓度（1-8 μM），结果如下：
SELECT和MeRIP-qPCR均显示：以上位点的m6A水平显著升高；而t-DBCO处理后，甲基化水平完全回归内源性基线；365 nm光照后，甲基化活性全面恢复，实现真正的ON-OFF-ON循环控制。
图3. CliPEdit策略调控dCas9介导的位点特异性RNA m6A甲基化
mRNA稳定性：Actb A1216位点m6A修饰显著降低mRNA稳定性，该效应可通过CliPEdit策略可逆调控。
蛋白表达：Foxm1位点甲基化导致FOXM1蛋白表达下调，t-DBCO"关闭"后蛋白恢复，光照"开启"后再次下调。
选择性调控多个RNA：共转染不同gRNA，可独立控制多个RNA位点的甲基化状态；对非靶向位点无影响，证明高特异性。
图4. CliPEdit策略调控M3M14 - dCas9介导的RNA m6A甲基化功能
该研究团队成功将CliPEdit策略应用于无需PAM序列的dCas13b-M3M14系统，同时在更短的crRNA上实现同等高效的甲基化调控，进一步验证了CliPEdit策略的普适性和模块化特征。
CliPEdit 策略的提出，让RNA功能调控从传统“单向开关”模式迈入可编程多步骤调控新阶段。该策略首次在单一分子框架内整合生物正交连接与光控裂解，实现RNA结构的可逆循环调控；同时适用于dCas9和dCas13系统，具有广泛适用性；为解析单个m6A位点的动态功能、研究RNA修饰与细胞命运的因果关系提供了不可替代的工具。
在这项研究中，涉及大量的m6A水平定量检测和mRNA表达分析，对实验数据的准确性和重复性提出了极高要求。研究团队选择了翌圣生物（YEASEN）的两款核心产品，为整个研究提供了坚实可靠的分子检测支持。
▶️ 11142ES｜Hifair®V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR
本研究中，所有反转录步骤均由11142ES完成，为MeRIP-qPCR和mRNA稳定性分析提供了纯净的cDNA模板。
核心优势：
✅️ 操作简便：基因组去除和反转录一步完成；
✅️ 合成出色：不同GC含量基因反转录表现出色；
✅️ 高灵敏度：样品检出率高，最高灵敏度可达1 pg。
▶️ 11201ES｜Hieff®qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox )
全文SELECT qPCR、MeRIP‑qPCR、mRNA 稳定性检测 荧光定量试剂，支撑所有量化数据产出。
核心优势：
✅️ 即用型：仅需加模板和引物，操作极简，污染风险低；
✅️ 精准定量：在宽广定量区域内保持良好线性关系，确保qPCR结果准确可靠；
✅️ 稳定可靠：历经市场长期验证，性能稳定可靠，广受科研用户信赖。
|
分类 |
产品定位 |
产品名称 |
货号 |
|
RNA提取 |
动物组织/细胞总RNA提取，避开有毒试剂，最快15 min完成 |
MolPure® Flash Cell/Tissue Total RNA Kit 快速细胞/组织总 RNA 提取试剂盒 |
19221ES |
|
反转录 |
5 min高效高产反转 预混液(含gDNA去除) |
Hifair® AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (DNA digester plus) |
11155ES |
|
qPCR染料法 |
高灵敏显色示踪荧光定量预混液 |
Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix |
11188/89/90ES |
|
高灵敏通用型定量预混液 |
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Master Mix |
11184ES |
