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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
深圳市安必胜科技有限公司
- 英文名：
PowerWater® RNA Isolation Kit
- 库存：
大量
- 保存条件：
常温
- 规格：
50次
PowerWater® RNA Isolation Kit专门设计用于提取各种已过滤好水样滤膜的总RNA。使用了我们专利的抑制因子去除技术（Inhibitor Removal Technology®），进验证，可从富含抑制因子的水样中获得高质量RNA。兼容市面上所有常见类型滤膜，可选用我们的灭菌过滤装置。提供了RNase-Free DNase I，提取过程中消化掉基因组DNA，节省事后处理时间。
PowerWater® RNA Isolation Kit使用前，先把水样过滤到滤膜上。可从MOBIO单独购买已消毒的带滤膜一次性过滤装置，或用户自备。把过滤好水样的滤膜放入特配研磨珠的厚壁研磨管。加入专利的裂解缓冲液以增强陷入滤膜孔内微生物的裂解作用，涡旋振荡充分均质化样品。去除蛋白和抑制因子后，总RNA选择性吸附到MOBIO的硅胶离心柱上，DNase I消化基因组DNA，经过清洗，洗脱RNA。此时，最终RNA可直接用于RT-PCR、qRT-PCR、cDNA 合成等RNA应用。
聚醚砜0.22μm滤膜提取的水样总RNA，上条带为23s rRNA，下条带为16S rRNA
凝胶电泳中RNA出现降解
β巯基乙醇可破坏RNase，需要现加现用。若依然出现RNA降解，可能要注意以下原因：
- 新鲜采样，若水样不能立刻处理，4℃保存。室温或-20℃保存，会导致RNA降解损失。
- 根据样品现用现配PWR1与β巯基乙醇混合液。
- 非变性凝胶不能跑RNA。关于变性凝胶跑RNA，详见电泳部分。
- RNA降解成小片段甚至单个核苷酸可增加260吸光值，所以260/280读数可反应RNA质量。比值大于2.3即表示RNA出现降解。
A260/280读数偏低
纯净的RNA此读数因为1.9-2.1。若比值低于1.6，表明RNA有蛋白污染。
- 检查流程，DNase I消化后必须用PWR7溶液进行冲洗。
- UV分光光度计法检测的样品水溶液pH过低也会影响280对蛋白的检测的灵敏度*。用10mM Tris pH 7.5稀释RNA，重新测定260/280.
assessment of nucleic acid purity. BioTechniques 22, 474.
最终RNA有基因DNA污染
PowerWater® RNA Isolation Kit提供了高质量的RNase-free DNase I用于离心柱上的DNA消化。使用试剂盒提供的PWR6溶液，DNase I的活性可以充分发挥。
- 必须使用试剂盒提供的缓冲液制备DNase I。
- 保证15min的消化孵育时间。缩短孵育时间可导致基因组DNA消化不完全。孵育过程RNA不会被降解。你也可以最多把DNase I孵育效果过程延长至30min。
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文献和实验Isolation of Total RNA from Difficult Tissues
techniques to help overcome problems associated with isolating total RNA from difficult tissues. The tips provided are based on RNA isolation by a guanidinium thiocyanate/acid phenol:chloroform extraction method (e.g. Ambion"s ToTALLY RNA™ Kit). Note
Isolation of Total RNA from Animal Cells use RNeasy Mini Kit
. 注意事项 1. All steps performed at room temperature. 2. RNA can be stored at –80°C for short time. 3. At step 8, it is needed to prolong the treated time for cell >5 x 106.
，第一：采用直接过柱子方法，彻底抛弃了TRIzol苯酚，氯仿原理方法，使用无毒原料，并且添加了有自主知识产权的去除多糖多酚成分解决了多糖多酚和代谢产物对于RNA的破坏和干扰分离。第二：突破了直接过柱子的方法DNA去除的技术难点，解决了DNA残留过多问题。经过实践过程中，几十种国内外试剂盒包括Qiagen的RNeasy mini kit 提取失败的例子，包括棉花苹果等试剂盒不易提取的样品，使用北京艾德莱生物的EASYspin植物RNA提取试剂盒，20分钟可以轻松提取，不需要液氮，无苯酚氯仿。高质
