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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 细胞类型:
源性细胞
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 库存:
41
- 英文名:
RL95-2
- 生长状态:
良好
- 年限:
2年
- 运输方式:
常温避光
- 物种来源:
人
- 规格:
T25
细胞介绍:
该细胞系源自一名65岁白人女性子宫内膜腺癌组织,1983年由DL Way建系。该细胞表达a-角蛋白,细胞表面具有微绒毛。
细胞特性:
1)来源:子宫内膜腺癌
2)形态:上皮细胞样,贴壁生长
3)含量:>lxl06 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装
人子宫内膜癌细胞(RL95-2)接受后的处理:
1.收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
4.如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5.接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
细胞用途:仅供科研使用。
本公司的细胞培养操作规程,供参考
1)培养基及培养冻存条件准备:
1.准备 DMEM/F12 培养基,90%;胎牛血清,10%。
2.培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37°C,培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理:
复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入lmL培 养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
人子宫内膜癌细胞(RL95-2)对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。力口2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37°C培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的 培养基终止消化。轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入lmL培养液后吹匀。移入到事先准备的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
细胞冻存:待细胞生长状态良时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行,后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮,加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每lml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
注意事项:
收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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文献和实验首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热)。从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的),吸去培养液,可用PBS洗两遍。也可不洗。加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定,如250毫升的瓶子加1毫升就行了),让它都浸湿细胞就可以吸去了。等个三十秒就在手上拍打,不要太用劲。就可以看到细胞脱落了,再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多,否则难吹打成单个细胞!),制成细胞悬液,再传至消毒的培养瓶中(我一般是1传三,三天后又可以传代了)再加
RNA Markers的使用方法(适用于RNA Marker RL1,000、RL6,000、RL10,000)
RNA Marker ( RL1,000; RL6,000; RL10,000)可以进行一般琼脂糖凝胶电泳和变性琼脂糖凝胶电泳。以RL10,000为例,具体使用方法如下:普通琼脂糖凝胶电泳时1.按下列组份配置RNA Marker样品。2.均匀混合后65℃加热10分钟,迅速冷却至室温(最好用PCR仪)。3.使用高质量的琼脂糖,用1×TAE Buffer制备3%凝胶*,制胶时凝胶中请加入溴乙锭(最终浓度:1 μg/ml)。4.将上述操作2配制的Marker样品加样后,在1×TAE Buffer中
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