人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)

人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)
细胞介绍：
NCI-H446细胞株从一位小细胞肺癌患者的胸水中建立。细胞的原始形态并不具有小细胞肺癌特征。这个细胞株是小细胞肺癌的生化和形态学上的变种，表达神经元特有的烯醇酶和脑部肌酸激酶同功酶。左旋多巴脱羧酶、蚕素、抗利尿激素、催产素或胃泌激素释放肽未达到可检测水平。C-myc DNA序列扩增约20倍，c-mycRNA比正常细胞增加15倍。初传代培养基用添加10 nM氢化可的松,0.005mg/ml胰岛素,0.01 mg/ml铁传递蛋白，10 nM 17-beta-雌二醇,30 nM酸钠的 RPMI 1640, 95%，胎牛血清,5%。

细胞特性
1)来源：肺；转移灶：肋膜渗出癌；小细胞肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。

细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基，90%;北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号 16000-044)，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%完全培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。

注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。