小鼠IgG1和2亚类单抗（仅支持腹水中IgG1/2单抗）纯化

单克隆抗体的制备过程

只介绍单抗的纯化，这里只列出二者对小鼠亚型的亲和特性：     从上面讲的，综合考虑经济因素以及纯化效率，可以知道除IgG1需要用Protein G外，其它亚型的抗体一般都选择Protein A亲和纯化，IgM的纯化方法比较需要运气，如果不可以用Protein A进行亲和纯化，只好看稍后介绍的方法了。 言规正传，这里简单介绍一下用Protein A或者Protein G从腹水中纯化单抗的操作方法： （1）预处理。买来的Protein A或者Protein G

杂交瘤技术基本程序与方法

瘤细胞培养上清液，由于其中单抗的浓度较低，应先将其浓缩10-20倍左右再检测。小鼠腹水中的单抗浓度虽很高，但也含有小鼠本身的各类Ig，它们也会与相应抗血清发生反应，使鉴定结果出现混乱，即使将腹水稀释10-20倍后再检测也不能完全避免上述情况的发生，因此一般不用腹水型单抗作为被检样品。 材料： a、小鼠IgG及其亚类IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM、IgA的抗血清。 b、0.06mol/L巴比妥钠-盐酸缓冲液（PH8.6）。 c、1%琼脂糖凝胶：1g琼脂糖加入100ml 0.06ml/L PH

丁香园论坛资料整理：流式细胞基本知识QA

，那么它的isotype 是mouse IgG2a， 所以可以用purified（纯化的） mouse IgG2a来做OX-42的同型对照（Isotype Control）。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型对照：是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类，若使用直接免疫荧光染色法，同型对照也应标记荧光色素，如IgG1 FITC、IgG2ａ、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外，同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F：P比值（标记的荧