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文献和实验最常用的检验乙型肝炎病原体的试验。以前又称澳大利亚抗原或肝炎协同抗原。乙型肝炎病毒是 DNA病毒。在乙肝病人血清中可发现 3种形态不同的病毒颗粒。即大球形颗粒( Dane颗粒)、小球形及管状颗粒。前者为完整的乙肝病毒颗粒,含有病毒的表面抗原( HBsAg)、核心抗原、 e抗原及 DNA 多聚酶等;后两者的主要成分为 HBsAg。 HBsAg是一种含糖的脂蛋白,由 6种多肽组成。有共同的抗原决定簇“ a”和几种亚型抗原决定簇 d、 y、 w、 r,按不同组合构成多种亚型。我国
试剂及配制 1. HRP和兔(或羊)抗HRP:抗HRP用HRP免疫兔(或羊)获得。 2. 0.075mol/L醋酸钠-0.15 mol/L醋酸铵等量混合液 3. 0.1mol/LHCl和0.01mol/LHCl 4. 饱和硫酸铵溶液 5. 0.01mol/L NaOH 操作方法 1. 取兔(或羊)抗HRP血清5ml,16000r/min离心20min,去沉淀; 2. 于收集的上清中加入HRP(2mg/ml)溶液1ml,室温缓慢搅拌1h,同上离心;
和第3支空试管中,然后往第2支试管中加0.1ml抗HRP,往第3支试管中加0.1mg/ml HRP 0.1ml; 5. 混匀,在室温放1h后观察。如第2支试管中产生沉淀,说明其对应的第1支反应管中抗原过量;如第2支试管中不产生沉淀,而第3支试管中产生沉淀,说明其对应的第1支反应管中抗体过量; 6. 制备PAP时,HRP的浓度应选取抗原过量管的前一管。 [附注2] 兔(或羊)抗HRP的制备 1. 兔抗HRP的制备:取HRP1mg溶于生理盐水中,加弗氏完全佐剂1ml充分乳化
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