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- 2025年07月13日
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一年
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100
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上海雅吉
我公司提供各指标PCR试剂盒，Elisa试剂盒和胶体金试纸条，还可以定制PCR试剂盒，欢迎新老客户来电咨询报价索取说明书。
【包装规格】 50T/盒
【预期用途】
本试剂盒利用实时荧光PCR原理，定性检测，对引起的疾病诊断及疗效评估有重要指导意义。
【检验原理】
本试剂盒针对的高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。
【主要组成成份】
| 序号 | 组成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
| 1 | RT-PCR反应液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
| 2 | 逆转录酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
| 3 | Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
| 4 | 阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
| 5 | 阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
| 6 | 说明书 | 1份 | 1份 |
注：阴性对照为偶蹄兽类基因组DNA，阳性对照为失去活性的cDNA。
牛瘟病毒实时荧光定量PCR试剂盒部分产品图片如下：
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1. 适用标本类型：发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。
2. 标本采集，方法如下：
(1) 血清：用一次性注射器取静脉血2-3ml，转至5ml 的干燥管中，密闭送检。
(2) 肠内容物：无菌条件下取肠道内容物约1g 左右，置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)的5ml 离心管中，立即送检。
(3) 组织脏器：取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g，置一1.5ml的洁净离心管中，密闭送检。
3.应避免标本间交叉污染。
4.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。
牛瘟病毒实时荧光定量PCR试剂盒检验方法：
1.试剂准备（试剂准备区）
（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数
| 单反液配制表(每份) | RT-PCR反应液 | 15.0 μL |
| 逆转录酶 | 2.0 μL | |
| Taq酶 | 3.0 μL |
(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备（样本处理区）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。
4. PCR（PCR扩增区）
（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。
（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。
| 反应体积 | 25 μL | 通道选择 | FAM通道采集荧光信号 |
| PCR 反应 条件 |
步骤 | 条件 | 循环数 |
| 反转录 | 42℃：10分钟（min） | 1 | |
| 预变性 | 95℃：3分钟（min） | 1 | |
| 预扩增 | 95℃：5秒（s） | 5 | |
| 55℃：40秒（s） | |||
| PCR扩增 | 95℃：5秒（s） |
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文献和实验用Bioteke One-step SYBR real-time RT-PCR Kit 进行荧光定量PCR后，结果如图3。 实验结论 经过不同样品的扩增后，可以看出BioTeKe公司的2×SYBR real-time PCR premixture Kit比T公司的荧光定量PCR试剂具有较高的扩增效率，在荧光值和灵敏度方面也有巨大的优势。另BioTeke公司的一步法Real-time PCR试剂盒也拥有很好的扩增效果。 同时，为了进一步证明BioTeke的实时荧光定量产品的质量，BioTeke公司
【公告】丁香通试用中心：10月免费试用装精选（10月18日有更新）
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。目前被普遍使用的多种常规PCR方法如各种凝胶电泳PCR法，终点荧光定量法或PCR-ELISA法叫做终点PCR法。实时荧光定量PCR法最大的优点是克服了终点PCR法进入平台期或叫饱和期后定量的较大误差，实现DNA/RNA的精确定量。普通PCR技术发明于1983年，而实时荧光定量PCR技术发明于上世纪九十年代并于1996年生产出了世界上第一台实时荧光定量PCR仪，实时荧光定量PCR技术得以实现的技术要素主要有荧光定量PCR试剂盒和实时荧光定量PCR仪，我国荧光定量PCR试剂盒研发实力强大，生产厂家较多
