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6~12 个月
- 英文名:
rAAV-EF1α-DIO-axon-GCaMP6f
- 供应商:
枢密科技
- 规格:
滴度≥2.00E+12 vg/mL,5ul
钙离子成像技术(Calcium imaging system)属于光遗传学技术中的一类,实际检测的是细胞或组织中Ca2+的浓度变化,将钙浓度变化转化为荧光信号。且钙离子是细胞信号传导中的重要信使,从而通过荧光信号强度变化来检测神经元的活动。
名称释义:
rAAV: Recombinant adeno-associated virus, 重组腺相关病毒。以重组腺相关病毒为载体,安全性高(目前还没有发现rAAV对人体致病),免疫原性低(感染后很少被免疫系统所清除),表达时间长。
EF1α:elongation factor 1-alpha,人类靶向延长因子,广谱性强启动子。
DIO:Double-floxed inverse Orientation, 是和Cre重组酶配合控制目的基因表达的元件。如果没有Cre重组酶的话目的基因不表达,在有Cre 的情况下目的基因才能开始表达。
GCaMP6f:GCaMP 蛋白,由cpEGFP 蛋白、CaM (calmodulin 钙调蛋白)、M13 肽这三个结构组成,当有钙离子存在时,CaM 和M13 结合,连带引起cpGFP 蛋白的构象,增强荧光信号。在实验中用于指示细胞中的Ca 信号活动。GCaMP6 作为新一代的GCaMP荧光蛋白,可以特异高效地反映细胞内游离Ca2+浓度的变化。它有三种常用的亚型,6s,6f 和6m,其中对于钙离子的结合力,6s>6m>6f,所以6s 最敏感,适合低频信号的指示,6f 解离最快,适合高频信号的指示,6m 结合活性适中,适用的范围最广。
axon-GCaMP6:Axon-GCaMP6系统是由常规的GCaMP蛋白耦合一个驱动轴突定位的靶向元件GAP43(growth associated protein-43)构成。从而实现axon-GCaMP在树突和远端轴突中表达。因此可以检测轴突中钙离子浓度的变化。
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文献和实验rAAV 在神经科学研究中的应用方向 rAAV 血清型的选择 01 用于神经元示踪的血清型⸺AAV2-retro、AAV1、AAV9 使用 AAV 精确标记神经回路需要考虑可逆性,包括神经元的顺行和逆行标记,以及是否跨突触(图 2)。目前,只有两种血清型可 以用于神经元顺行标记,即 AAV1(图 3)和 AAV9,高滴度的 AAV9 可顺向跨突触。唯一可用于逆行标记是 AAV2-retro(图 4)。 图 2 AAV 等工具病毒在神经环路示踪应用中的传播方向和层级 [Neurosci
蛋白磷酸化就在有丝分裂、细胞死亡、DNA 损伤修复、DNA 复制和重组过程中发挥着直接的作用。 组蛋白翻译后修饰多发生在组蛋白的 N-端尾部,包括甲基化、乙酰化、磷酸化、ADP-核糖基化、泛素化和小分子泛素化修饰,这些修饰有助于其他蛋白质与 DNA 的结合,从而产生协同或者拮抗作用来调控基因转录。例如,乙酰化使组蛋白尾部正电荷减少,从而削弱了与带负电荷 DNA 骨架的作用,而促进染色质呈开放状态, 甲基化激活或抑制基因功能主要依赖于修饰的位点,主要与赖氨酸残基的单甲基化、双甲基化或三甲基化有关。 组蛋白修饰最基本
应用于活体钙成像研究,其发出荧光的原理在于钙离子浓度上升导致M13与CaM结合,从而改变cpEGFP的构象,将其从无荧光的状态变为绿色荧光 GCaMP蛋白的基本结构和原理(来自WIKI)2)常见的钙离子指示剂1、GCaMP6系列:第六代GCaMP蛋白(GCaMP6)有三种不同亚型:GCaMP6s、GCaMP6m、GCaMP6f,其特点各不相同(图4)。GCaMP6s高敏感,适合低频信号的指示,;GCaMP6f有快速动力学曲线,解离最快,适合高频信号的指示,需要根据实验需求进行选择。 图4 几种不同
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