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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-80℃
- 保质期:
6~12 个月
- 英文名:
rAAV-CaMKIIα-hM4D(Gi)-EGFP
- 供应商:
枢密科技
- 规格:
滴度≥2.00E+12 vg/mL,5ul
化学遗传学技术/DREADDS 技术可以用来调控神经元或其他类型细胞的活动。例如将病毒注射到小鼠的特定脑区,hM4D(Gi)在小鼠中表达后,通过腹腔注射或饮食等方式给CNO(clozapine-N-oxide),可以实现长时间范围(小时量级)的对神经元的抑制。
名称释义:
rAAV: Recombinant adeno-associated virus, 重组腺相关病毒。以重组腺相关病毒为载体,安全性高(目前还没有发现rAAV对人体致病),免疫原性低(感染后很少被免疫系统所清除),表达时间长。
CaMKIIα:Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II,兴奋性神经元启动子。
hM4D(Gi):hM4D(Gi)是从人毒蕈碱乙酰胆碱受体M4 上改造的仅对CNO(clozapine-N-oxide)有反应的人工受体(designer receptors exclusively activated by designer drugs,DREADD),不再受乙酰胆碱激活。在一些神经元里,CNO 结合hM4D 后,激活Gi 蛋白偶联的内向钾离子通道GIRK,使得细胞膜超极化,抑制神经元细胞动作电位发放。在不表达GIRK 或是Gi 的细胞中,hM4D 的功能会有所不同。
EGFP:绿色荧光蛋白,激发波长488nm,发射波长507nm。
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文献和实验的GPCRs可以激活G蛋白内向整流钾通道(GIRK),在CNO的作用下, hM2Di和hM4Di受体被激活可以抑制神经元的放电活动,其中使用最多的Gi-DREADD是hM4Di。也有研究表明,hM4Di可以抑制神经递质的释放,从而达到抑制神经元活动的效果。 图4 hM4和乙酰胆碱结合,作为信号分子激活Gi耦联的GPCRs信号通路和元生物拥有多种化学遗传现货病毒库,欢迎咨询。(3)DREADDs技术的应用策略借助病毒载体的DREADDs技术应用一般包括以下几个关键步骤(图5):1、 根据实验目的,确定合适
100ul 苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提,并沉淀出cDNA双链,溶解于50ul双蒸水中。三、cDNA质量检测根据一个油菜线粒体基因Ccl1(GI:1694628)的cDNA序列设计特异性引物(CF:5′-TGA CAC GAG ATG ATA AAG A-3′ CR:5′-CGT AAC AAT AGA GCA GGA TAG-3′),目标片段大小为427bp。以反转录所得cDNA为模板,若PCR扩增能得到目标片段,说明线粒体mRNA已经成功反转录。四、Rsa I酶切双链cDNA
xiaoleishi 我现在做的是小胶质细胞,要做akt信号通路,但现在查到akt抑制剂有很多种,应该怎样选择?谢谢。 pennhmp116 一般来说某个靶点抑制剂的研究也是不断进展的,随着化工技术和计算机模拟分析模拟技术进步,许多靶点上新的抑制剂都比早期的更为有效、更加具有特异性,水溶解性更好、性质更稳定等优点。除了靶点的活性外,其毒性也是决定它是否现在应用于动物体内实验,将来应用于临床成功与否的关键。如NF-kB抑制
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