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- 2025年07月15日
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- 提供商：
raybiotech
- 服务名称：
蛋白表达与纯化实验技术服务
- 规格：
1ml
为客户提供蛋白纯化服务，纯化方式包括亲和层析纯化、凝胶过滤、离子交换、疏水层析等，客户可根据需要选择合适的纯化方式。
1. 目标基因全基因合成：
1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因，我们免费提供给客户。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
3. 合成设计好的基因序列。
2. 目标基因亚克隆：
1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 提供如下表达载体：提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
3. E. coli表达菌株转化及筛选：
1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
5. 可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
4. 目标蛋白表达及纯化：
1. 摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
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文献和实验GST表达融合蛋白 载体 pGEX-KG 大小：5006bp，氨苄青霉素抗性(Ampr)，IPTG诱导表达 酶切位点：BamHI 930、SmaI 937、EcoRI 962、XbaI 966、NcoI 974、SalI 980、XhoI 985、SacI 992、HindIII 994 GST分子量： 构建pGEX-KG-YFG重组 质粒 1、分析所感兴趣的基因(your favorite
特异性。• 表达标记蛋白：修饰内源的目标基因，增加亲和标签或荧光蛋白的序列。标记蛋白的信号可与基于抗体的检测相关联。该方法有其局限性，当目标蛋白较小，或者结构较敏感的时候，融合亲和标签或者荧光蛋白有可能在结构上影响目标蛋白，从而改变其免疫原性。• 免疫捕获加上质谱分析：将免疫捕获与 MS 分析相结合，以确定与纯化的抗体直接作用的蛋白质，以及可能与目标蛋白形成复合物的蛋白质。该方案能够确定与纯化的抗体直接作用的蛋白质，以及可能与目标蛋白形成复合物的蛋白质，但是需要依赖昂贵的仪器和实验
相关专题 蛋白表达技术全攻略 GST融合蛋白的表达与纯化原理 GST 纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白，并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2g IPTG 溶解入10ml 水，过滤除菌，分装，-20℃保存。u
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