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上海恪敏生物科技有限公司
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箱
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文献和实验方法。 收获细胞(保证健康的单细胞悬液)。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager(MDCI10000)观察到细胞融合度应为80-90%,且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中,例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注:可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管,以实现单细胞悬浮。
血清的Hanks液(5%NBS-HBSS),轻揉腹部吸出腹腔液体(内含腹腔细胞),反复抽吸几次。3、1500r/min离心8min,洗细胞2次。4、将腹腔细胞用含10%小牛血清的RPMI-1640液(10%NBS-RPMI-1640)配成2×106/ml,加到24孔平底培养板,1ml/孔,置5%CO2,37℃温箱孵育2h。5、每孔用5% NBS-HBSS洗3次,弃去未粘附细胞,贴壁细胞为巨噬细胞单层。6、将LPS(10μg/ml)加入巨噬细胞单层,每孔1ml,培养4h;加入10%NBS-1640 1ml
缓冲液为30mmol/L NaOH, 1mmol/LEDTA。 (4) 将胶浸入7% TCA 中,室温放置30 分钟(直至染料由蓝色变至黄色),取出置滤纸上,干燥数小时。 (5) 用保鲜膜包裹干燥的胶,室温压X 光片(用增感屏时-70℃压片)。 二、其它cDNA 合成技术 除Riboclone M-MLV(H-)cDNA 合成技术外,Promega 公司还提供有多个AMV 合成试剂盒,不同试剂盒所提供的引物或引物一延接头(Primpr-Adaptor)不同,有oligo(dT
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