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1ml/T25
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1. 用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；
2. 待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:8；
3．传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
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文献和实验首先，它肯定不同于原代细胞系的，最大的区别，原代的心肌细胞基本不能分裂，而H9C2可以分裂，最大的区别了吧！原代心肌细胞会跳动，你的H9C2不会吧。虽然都是梭形的，但是H9C2来源于胚胎期心脏，而心肌细胞一般用新生大鼠分离获得。H9C2与原代心肌细胞有那么大区别，当然不能替代它，所以在研究方向上，你要根据自己的实验需求选择自己合适的细胞，一般来讲呢，如果你研究与心脏相关的信号通路，我建议你还是选用细胞系，因为它可以分裂，获得细胞容易，而且，因为H9C2展现一些成肌细胞特性，所以一般文章都说H9C2
luking2006 我用H9C2心肌细胞系做心脏的自噬研究，想请教细胞系传代次数多>30代，会对实验结果造成影响吗？看到有文献说细胞系传代多了会引起基因表达的改变。是这样吗？很急切，先谢谢大家了。我前期用传代多的细胞系做出的实验结果和大体的不一致，不知是不是这个原因。 anyi63 我们用的是h9c2细胞株，细胞系是细胞株50代以后遗传突变带癌细胞特点，有可能在培养条件下无限传下去 cxc11
紫石榴 最近在研究心肌缺血对某microRNA的调控，有文献报道在原代细胞中随时间下调，我用的是H9c2心肌细胞系做的，想做个验证，顺便找最佳干预点。考虑经费问题，所以先用RT-PCR的方法做趋势，再上real time。我是提取总RNA，定量后（量和纯度都还好），用过茎环引物逆转录，再PCR电泳的，但做出的结果与设想趋势不符，且重复性很差，不知道哪里不对。麻烦高手指导下。 版主zhujoker留言: RT-PCR这种半定量是不可
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