非蛋白质巯基含量检测试剂盒 可见分光光度法

非蛋白质巯基含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号：BC1430
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液一	液体25 mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液体25 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体50 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×1瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 提取液的配制：将提取液一和提取液二按体积比1：1的比例混合配制，按照样本数量配制并在当天用完；
2. 试剂二：临用前加入5 mL无水甲醇充分溶解备用，2-8℃保存八周；
3. 标准品：10 mg半胱氨酸，临用前加入1.65 mL提取液配制成50 µmol/mL的半胱氨酸标准溶液备用，2-8℃保存1个月。

产品说明：
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

巯基基团与5,5’-二硫代-双-*甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。

技术指标：
最低检出限：0.0007 μmol/mL
线性范围：0.003125-0.3 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿、甲醇、研钵/匀浆器、超声破碎仪、冰和蒸馏水.

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例：

1. 取0.1g小鼠肾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定-A对照=0.791-0.033=0.758，带入标曲y=3.4566x+0.159，得出x=0.1733，按样本质量计算含量得：

非蛋白质巯基含量（µmol/g质量）= x÷W=0.1733÷0.1=1.733 µmol/g 质量。
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