土壤亮氨酸氨基肽酶（L-LAP）活性检测试剂盒 微量法

土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC4025
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
试剂一	液体30 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×2瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶加入1.875 mL丙 酮溶解，用不完的试剂2-8℃保存一周。

产品说明：
S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。
S-LAP分解L-亮氨酸对硝基 苯胺生成对硝基 苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、离心机、水浴锅、研钵、甲苯（不允许快递）、丙 酮（不允许快递）、30-50目筛、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
取新鲜土样自然风干或37℃烘干，过30-50目筛。
二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至405nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 加样表：

	测定管	对照管
风干土样（g）	0.03	0.03
甲苯（μL）	15	15
震荡混匀，室温静置15min。
试剂一（μL）	255	255
试剂二（μL）	30	-
置于30℃水浴锅准确反应1h后，立刻煮沸5min（盖紧，缠封口膜，防止崩开水分散失）。流水冷却至室温。
试剂二（μL）	-	30
14000g，常温离心10min，取200μL上清于405nm处测定吸光值，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

实验实例：

1. 称取两管0.03g三叶草土样，分别记为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.6-0.17=0.43，计算酶活得：

S-LAP活性（U/g 土样）=0.844×ΔA÷W=0.844×0.43÷0.03=12.097U/g 土样。

1. 称取两管0.03g土样，分别记为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.569-0.128=0.441，计算酶活得：

S-LAP活性（U/g 土样）=0.844×ΔA÷W=0.844×0.441÷0.03=12.407U/g 土样。
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