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土壤谷氨酰胺酶(S-GLS) 活性检测试剂盒 微量法

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  • ¥1200
  • Solarbio已认证
  • 北京
  • BC3975
  • 2025年07月15日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      2-8℃

    • 保质期

      6个月

    • 英文名

      Soil Glutaminase(S-GLS) Activity Assay Kit

    • 库存

      99

    • 供应商

      北京索莱宝科技有限公司

    • CAS号

      BC3975-100T/48S

    • 规格

      100管/48样

    土壤谷氨酰胺酶(S-GLS)活性
    检测试剂盒说明书

    微量法
    注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
    货号:BC3975
    规格:100T/48S
    产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
    试剂名称 规格 保存条件
    试剂一 液体30mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂二 粉剂×2 2-8℃保存
    试剂三A 液体0.4mL×1支 2-8℃保存
    试剂三B 液体1.6mL×1瓶 2-8℃保存
    试剂四 液体2mL×1瓶 常温保存
    标准品 液体1mL×1支 2-8℃保存
    溶液的配制:
    1. 试剂二:临用前取1瓶加入6mL蒸馏水溶解,用不完的试剂2-8℃保存一周;
    2. 试剂三:临用前根据样本量按比例(A:B=1:4)配制,现配现用;若发现变色后则不能再使用;
    3. 标准品:10µmol/mL氮标准液。取15μL 10µmol/mL氮标准液,加入945μL蒸馏水,充分混匀,配制成0.156μmol/mL的标准液待测。(实验中每管需要80μL,为减小实验误差,故配制大体积。)
    产品说明:
    S-GLS(EC3.5.1.2)存在于某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

    S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用靛酚蓝比色法测定氨增加的速率,即可计算其酶活性。
    注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
    需自备的仪器和用品:
    可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30~50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)、冰和蒸馏水。
    操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料”附件
    一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
    新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。
    二、测定步骤
    1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至630nm,分光光度计用蒸馏水调零。
    2. 样本测定(在EP管中加入下列试剂)
    试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管
    风干土样(g) 0.05 0.05 - -
    甲苯(μL 25 25 - -
    充分震荡后常温静置10min。 - -
    试剂一(μL 275 275 - -
    试剂二(μL 200 - - -
    蒸馏水 - 200 - 80
    充分混匀,37℃水浴或恒温培养箱培养1h10000g常温离心10 min,取上清液于96孔板或者1.5mL EP 管中。 - -
    上清液 80 80 - -
    0.156μmol/mL标准液 - - 80 -
    试剂三 16 16 16 16
    试剂四 12 12 12 12
    蒸馏水 92 92 92 92
    混匀,室温放置30min,630nm处读取吸光值A,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管,计算ΔA测定=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。标准管与空白管只需测1-2次。

    注意事项:
    1. 当测定吸光值大于0.8时,建议将上清液用蒸馏水进一步稀释后测量。计算时乘以稀释倍数。
    2. 离心后若上清液仍含有少量杂质,可将上清液再次10000g,常温离心10min去除。
    实验实例:
    1. 取两管0.05g三叶草土,分别为测定管和对照管,按照测定步骤操作,96孔板测定吸光值,计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.8-0.175=0.625ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.044=0.224,计算酶活得:
    S-GLS(U/g 土样)=1.872×ΔA测定÷ΔA标准÷W=1.872×0.625÷0.224÷0.05=104.46 U/g 土样。
    1. 取两管0.05g林土样,分别为测定管和对照管,按照测定步骤操作,96孔板测定吸光值,计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.466-0.164=0.302ΔA标准=A标准管-A空白管=0.268-0.044=0.224,计算酶活得:
    S-GLS(U/g 土样)=1.872×ΔA测定÷ΔA标准÷W=1.872×0.302÷0.224÷0.05=50.477 U/g 土样。
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