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土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S-

GLS) 活性测定试剂盒
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  • ¥1300
  • xuanya
  • XY-SH197
  • 国产
  • 2025年12月17日
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    • 详细信息
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      65

    • 英文名

      solid-glutaminase, S- GLS

    • CAS号

      /

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/96样

    土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性测定试剂盒说明书
                                                微量法 100/96

        意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
    测定意义:
    GLSEC 3.5.1.2存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

    测定原理:
    S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。
    需自备仪器和用品:
    台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、甲苯、冰和双蒸水。

    试剂组成和配制:
    试剂一×1瓶,15 mL4 ℃保存;
    试剂二×1瓶,40 mL4 ℃保存;
    试剂三×1瓶,60 mL,常温保存;
    试剂四×1瓶,5 mL,常温保存;
    试剂五×1瓶,3 mL,常温保存;
    试剂六×1瓶,3 mL,常温避光保存。

    测定步骤:
    1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至420nm,蒸馏水调零。
    2、样品测定(在EP管中加入下列试剂):
    试剂名称(uL 测定管 对照管
    样本 0.1  
    甲苯 25 25
    振荡混匀,室温放置15min
    试剂一 100 100
    试剂二 400 400
    混匀,37℃水浴2 小时
    试剂三 525 525
    混匀,8000 g25℃离心10 min;取上清液,依次加入下列试剂
    上清液 130 130
    试剂四 30 30
    试剂五 20 20
    试剂六 20 20
    混匀,室温静置15min420nm处读取测定管和对照管吸光值,
    计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。

    注意:试剂六如出现沉淀,静置后取上清使用。

    酶活性计算:
    a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    标准条件下测定的回归方程为y = 3.8488x+0.0057x为标准品浓度(μmol/mL),y吸光值A
    单位定义:每g土样min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
     S-GLSnmol/min/g 土样)=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反总÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W
    V反总:反应体系总体积:1.05mLT:反应时间,2h=120minW:样本质量,g; 1000μmolnmol换算系数。

    b.96孔板测定的计算公式如下
    标准条件下测定的回归方程为y = 1.9244x+0.0057x为标准品浓度(μmol/mL),y吸光值A
    单位定义:每g土样min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
     S-GLSnmol/min/g 土样)=(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反总÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W
    V反总:反应体系总体积:0.525mLT:反应时间,2h=120minW:样本质量,g; 1000μmolnmol换算系数。

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