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- Solarbio
- 北京
- BC3120
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Plant Dehydrogenase(PDHA) Activity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC3120-50T/24S
- 规格：
50管/24样
活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号: BC3120
规格: 50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 试剂一 | 粉剂×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 液体100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 液体100 mL×1瓶 (自备) | 2-8℃保存 |
- 试剂一：使用前加少量水溶解，定容至30 mL，避光、4℃保存（尽量现配现用）；
- 试剂三：自备乙酸乙酯。提供一60mL棕色试剂瓶。
生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , PDHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态，能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。
受氢体2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，其还原产物三苯基甲替（Triphenyl Formazone，即TFF）呈现红色，在波长485nm处有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm测定其吸光值，即得植物脱氢酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、冰、研钵/匀浆器、蒸馏水、乙酸乙酯（不允许快递，请用户自备）。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取0.1g的植物组织，用双蒸水清洗3-4次，用滤纸吸干水分，备用。
二、测定步骤
- 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至485nm，乙酸乙酯调零。
- 操作表：取5mLEP管依次加入
| 加入试剂 | 对照管 | 测定管 |
| 样本（g） | 0.1 | 0.1 |
| 试剂一（mL） | - | 1 |
| 试剂二（mL） | 2 | 1 |
| 充分混匀，37℃，暗培养3h，取出后立即冰浴5min，去滤液，尽量用滤纸吸干样本，置于研钵/匀浆器中。 | ||
| 试剂三（mL） | 1 | 1 |
| 充分研磨（建议在通风橱操作）后全部移至离心管中，用少量试剂三冲洗研钵，一起加入离心管，用试剂三定容至2mL，10000rpm/min，4℃，离心5min，取上清，测定485nm下的吸光值。计算ΔA=A测定-A对照。 | ||
三、脱氢酶活力计算
酶活单位定义：在37℃时，每小时每克组织样本使反应体系吸光值每增加0.01为一个酶活单位。
脱氢酶活性（U/g/h）=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W
T：反应时间，3h；W：样本质量，g。
注意事项：
- 配制好的试剂一避光保存于4℃，尽量在一周内使用，若出现红色，则不能使用。
- 试剂三易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴口罩，戴乳胶手套操作。
- 反应完成后立即冰浴以终止反应，并去除干净残留的反应液。
- 如果测定出来的吸光值较大，需把样本适当稀释再进行测定，注意计算公式乘以稀释倍数。
- 称取1g芦荟叶片，用双蒸水清洗3-4次，用滤纸吸干水分，按照测定步骤进行操作，测得计算ΔA=A测定-A对照=0.120-0.012=0.108，计算酶活得：
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文献和实验| AuthorZikang Wang, Simin Yu, Yufan Nie, Ran Liu, Wentao Zhu, Zhiqiang Zhou, Yongqiang Ma, Jinling Diao | Publish_toJOURNAL OF HAZARDOUS MATERIALS |
| IF13.6000 | PMID37924702 |
一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
一、反应曲线 首先，我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图，可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，如下图所示： 二、反应原理 对于延迟区来讲，无规律可寻，对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点，并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等，此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
1. 液氮研磨1g左右的植物组织，转移到离心管中。改用研磨枪在冰上研磨，不加β-巯基乙醇 研磨时可加入适量的PVP、β-巯基乙醇。若CTAB准备2-3天内用完，则可将PVP、β-巯基乙醇直接加入其中。 2. 加入500µl的2*CTAB (60℃或65℃预热) ,颠倒混合均匀后在60℃或65℃水浴30m-1h小时,其间要上下颠倒混匀数次。 3.取出离心管，加入
