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- 百奥莱博
- WH0186-MEX
- 北京
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
319
- 英文名：
Rosetta（DE3) Competent E.coli
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100 μl×5|100 μl×10
特别提示：包括Rosetta（DE3)感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：Rosetta（DE3)感受态细胞
英文名称：Rosetta（DE3) Competent E.coli
产品货号：WH0186
产品规格：100 μl×5|100 μl×10
本制品是采用大肠杆菌Rosetta （DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107cfu/μg DNA，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。
基因型：F- ompT hsdSB（rB- mB-) gal dcm（DE3） pRARE（argU,argW,ilex,glyT,leuW,proL)（Camr)。
产品特点：
·具有氯霉素抗性。
·该菌适合于非毒性蛋白的表达。
·整合大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子所对应的tRNA，适合真核基因在原核系统中的表达。
注意事项：
1．感受态细胞应保存在-70℃，不可冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
2．进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3．为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到zuì低。
操作步骤：（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1．取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。
注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2．向感受态细胞悬液中加入目的DNA（100μl的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和），轻弹混匀，在冰浴中静置30min。
3．将离心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3 min，该过程不要摇动离心管。
注意：此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8 min左右，如果室温较低，可延长时间至8-15 min左右。条件允许建议使用42℃热激方法。
4．向每个离心管中加入900 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min（150rpm），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5．将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16h。
注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4000 rpm,2 min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）
保存条件：-70℃冻存，有效期6个月。
我公司销售的Rosetta（DE3)感受态细胞质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）
的生产任务”——因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的，当出现问题时，我们需要经验判断问题所在。宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢？ 知其然还要知其所以然。比如，菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。堪称经典的BL21系列就是lon和ompT蛋白酶缺陷型，也是我们非常熟悉的表达菌株。大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因，为T7表达系统而设计。 真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同，因此，在用原核系统
由它们的天然启动子驱动。在 Rosetta （ DE3 ） pLysS 和 Rosetta （ DE3 ） pLacI 中，稀有 tRNA 基因存在于分别带有 T7 溶菌酶和 lac 阻遏基因的同一质粒上。 Tuner 菌株为 BL21 的 lacZY 缺失突变株，能够调整培养物中所有细胞的蛋白表达水平。 lac 通透酶（ lacY ）突变使得 IPTG 均匀进入群体所有细胞，从而具有浓度依赖、水平均一的诱导表达。通过调整 IPTG 浓度，表达可从极低水平调节到极强、完全诱导的表达水平（通常
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