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- 百奥莱博
- MQ0058-NYL
- 北京
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
169
- 英文名：
GV3101 Electroporation-Competent Cell
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
10×50μl/50×50μl
特别提示：包括GV3101农杆菌电转感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：GV3101农杆菌电转感受态细胞
英文名称：GV3101 Electroporation-Competent Cell
产品货号：GV3101农杆菌电转感受态细胞
产品规格：10×50μl/50×50μl
GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：Strep和gent，赋予GV3101菌株链霉素和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。
GV3101电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率可达5×104cfu/μg；经pCAMBIA2301-ZH质粒(size:40kd)检测转化效率可达5×103cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
C58(rif R)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline
操作说明：
1.0.2cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5μg质粒DNA(质粒体积不大于6μl，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解)，用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3.启动电转仪，设置参数：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V(此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
4.6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50μg/ml kan时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50μg/ml kan，20μg/ml rif时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50μg/ml rif则需要28℃培养72-90h)。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
注意事项：
1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在盐，乙醇等污染，转化效率急剧下降；若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.利福平浓度不应高于25μg/μl，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/ml kan，若所用平板含有20μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
除了GV3101农杆菌电转感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| BTN60803 | 可保种型蓝白T载体 | 50 ng |
| BTN140391 | 大肠杆菌T1化学感受态细胞 | 0.1mL*10 |
| BTN130562 | 大肠杆菌Tuner(DE3)化学感受态细胞 | 0.1mL*10 |
| YT004 | 酵母质粒小量抽提试剂盒 | 50次 |
| YT449 | ISRE荧光素酶报告基因质粒(干扰素激活反应元件) | 1μg |
| YT481 | N端His标签融合蛋白质粒 | 1μg |
| SY0296 | pET-28a(+) Vector 表达载体 | 1μg |
| QN1055 | 鲑鱼精DNA(10mg/ml) | 1ml |
| BTN160686K | 零背景TA克隆试剂盒(Kan抗性) | 25次 |
| GL1189 | 氯化钙溶液(60mmol/L) | 100ml |
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文献和实验Agrobacterium growth and transformation (农杆菌培养及转化)
Growth and storage of Agrobacterium tumefaciens(农杆菌培养及转化) Strain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin, 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV3101
酵母转化 【求助】关于酵母电转化的问题 关于酵母电转化的问题 求助LiAc转化毕赤酵母的方法 酵母真核表达的感受态细胞的制备及电击转化的参数？ 如何将构建的质粒转化到酵母中？？ 为什么质粒酵母电转化不进去？？ 求助，毕赤酵母的转化 我想请教各位一个关于酵母转化的问题 农杆菌转化及其它 【交流】NATURE文章，讨论农杆菌植物转化过程中的植物基因组中的相关基因的产物在转化过程中的作用 含有RNAi表达载体的农杆菌可以直接转化成苗植株
1. 50 ml 离心管 2. 光谱仪 3. 紫外灯 4. 荧光显微镜 四、步骤 1. 挑取单克隆于5 ml LB液体培养中，28~30°C震荡培养。通常，LB中加入100 ug/ml 庆大霉素（农杆菌株GV3101携带抗性），50 ug/ml 大观霉素（载体携带）。 2. 将1 ml 过夜培养的农杆菌转接到25 ml LB液体培养基中（加有与1相同的抗生素，另外加入高压灭菌的乙酰丁香酮）。 3. 检测过夜培养的菌液OD600的值。 4. 5000 g，15
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