软骨RNA柱式提取试剂盒

特别提示：包括软骨RNA柱式提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：软骨RNA柱式提取试剂盒
英文名称：Cartilage RNA column Extraction Kit
产品货号：BTN101121
产品规格：50次

本试剂盒专门从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

试剂盒特点：
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA产率一般为5-15μg/100mg。
3. 操作简单，整个提取过程一般只需要10 多分钟。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA 纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。溶液B需4℃保存。

使用方法：
1. 先将50-200mg 新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入1mL溶液A溶解(溶液A使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀)，然后将研磨物转移到新的1.5mL离心管中，振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与溶液A一起用Polytron 匀浆机(内切式匀浆机)匀浆5-20秒，再转移到1.5mL离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯fǎng，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3.室温12000～15000g离心3～5分钟，两相间将有约5-10 毫米厚的细胞破碎物。
4. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
5. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到自备的RNase-free离心管中，加入50-100μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
12. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
14. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意：测定OD时不要稀释过度，否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA 测OD时一般zuì多只能稀释10-20倍。
15. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。