miRNA分离纯化试剂盒(沉淀法)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应miRNA分离纯化试剂盒(沉淀法)厂家，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：miRNA分离纯化试剂盒(沉淀法)厂家
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN90203
规格：50次
microRNA(miRNA)和RNA干扰研究是当今分子生物学研究的一大热点，但快速分离和纯化相关的小RNA十分棘手，是目前研究 miRNA的主要技术障碍之一。目前国外相关产品寥寥无几，并且基本采用先提总 RNA 再富集其中的小RNA的两步法策略，国内相关产品更是一片空白。百奥莱博为满足广大用户的需求，开发了具有自主知识产权的本产品。

试剂盒特点：
1.从总 RNA中直接分离纯化小RNA，不需要使用离心吸附柱。得到的小RNA 长度大部分在 200nt以下，包括 5S RNA、tRNA、 miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
2. 操作简单快速，整个过程只需要约30分钟。
3.小RNA 纯净，OD260/280一般都在 1.9以上。
4.可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。
5. 此方法能去除 90%左右的大 RNA，但会有少量残留大 RNA，如果需要纯度更高，可以选择 PAGE 回收法。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	10ml
溶液C	50ml
RNase-free 水	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在纯化好的100μl 总 RNA(含大 RNA和小RNA)中，加入50μl溶液A，振荡 30秒混匀。如果 RNA样品体积不足 100μl，可以用RNase-free水补足，如果体积超过 100μl，可以用本公司核酸浓缩剂浓缩到 100μl。
2.室温 12000～15000g离心 30分钟。小RNA在上清中，大 RNA在沉淀中。
 注意：离心时间不能短于30分钟，否则大 RNA沉淀不充分。
3.小心将上清液转移到干净的1.5mL RNase-free塑料离心管中。留下的沉淀可以用 75%乙醇洗涤后做大 RNA电泳对照用。
4.在上清液中加入200μl溶液B，振荡 30秒混匀。
5.室温 12000～15000g离心 10分钟，小心弃上清。由于溶液B中有惰性的助沉剂，所以得到的小RNA沉淀肉眼可见。
6. 加入1mL溶液C，震荡数秒。
7.室温 12000～15000g离心 10分钟，小心弃上清。
8. 短暂离心数秒，小心吸弃残留液体(约50μL左右)。
9.在沉淀中(含小RNA)加入30-100μl RNase-free 水，吹打溶解即得小RNA溶液。注意：不能只吹打管底部分，还需要吹打整个离心管管壁的离心面部分，因为上面也有有小RNA沉淀。
10. 最好先 PAGE-银染检测小RNA 纯度再使用。

除miRNA分离纯化试剂盒(沉淀法)厂家外，我公司正在打折促销以下产品：

·酿酒酵母Y2HGold化学感受态细胞
编号：BTN140390
英文名称：E.coli Y2HGold Chemical Competent Cell
规格：10×100μL
 酿酒酵母Y2HGold是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187 通过mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为：trp1，leu2，报告基因为：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1。

 Y2HGold-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1~174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768 ~881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。

 GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1~174位*基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768~881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait-BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y2HGold有四个报告基因：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(G1，G2，M1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。此外新报告基因AbAr与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，也可以降低酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。

Y2Hgold的基因型是：MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4Δ,gal80Δ，LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3，GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1

产品组成：

成分	规格
Y2Hgold感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/LiAc 4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、 SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入2-5μg预冷的目的质粒、10μLCarrier DNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)、500μl PEG/LiAc，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μl ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取50μl ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P - ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
4.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5. 同时转化2-3 种质粒时可增加质粒的用量。


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·人玻连蛋白
编号：BTN130874
英文名称：Vitronectin
规格：100μg
人玻连蛋白属于结构和功能同源的黏附蛋白组(纤维蛋白原，纤连蛋白，Von Willebrand因子)，能够在凝血早期与血小板和血管壁相互作用。当其表面被包被后，很低浓度的玻连蛋白就可促使内皮细胞黏附、诱导细胞分布和迁移，这种作用是时间和浓度依赖性的。当包被于组织塑料培养皿，玻连蛋白在低于0.1mg/cm₂的浓度下，就可促使无血清的培养基中的BALB/3T3纤维母细胞达到半数黏附。在大约0.2μg/cm₂达到最大黏附。


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·大肠杆菌JM109感受态细胞
编号：BTN90207
英文名称：E.coli JM109 Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-80℃保存几个月转化效率不发生改变。
2. recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组，提高纯化质粒的产量和质量。
3. JM109菌株基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi hsdR17(rk-mk+)relA1 supE44 D(lac-proAB)[F’traD36 proAB laqlqZ Δ M15 ]
4. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：无菌超纯水，SOB和SOC液体培养基，相关抗菌素。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。



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·DNA拓扑异构酶 I
编号：BTN120414
英文名称：DNA Topoisomerase I
规格：100U
DNA拓扑异构酶I来源于小牛胸腺，与来源于原核生物的酶性质不同，在无Mg2+的条件下也具有活性。而且，原核生物的DNA Topoisomerase I只作用超螺旋分子的负链，而本酶则能使来源于超螺旋分子正负链均形成松散型，DNA Topoisomerase I催化4种反应：
➤ 使环状超螺旋分子的超螺旋解开。
➤在单链环状DNA分子内形成绳结(Knotting)和解开绳结(Unknotting)。
➤ 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。
➤ 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时，发生两个分子的连结反应(Catenation)或者逆反应(Decatenation)。

产品组成：

成份	规格
DNA拓扑异构酶I(5000U/mL)	20μL
10×Buffer	1mL
BSA,10mg/mL	10mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在25μl反应体系，37℃条件下，15分钟内能催化超过95%的0.5μg pUC19RFI型(负超螺旋)DNA 松弛所需要的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。

热灭火：65℃加热20分钟。

注意事项：
➤ pBR322 DNA和φX174 DNA的RF I(超螺旋分子)用DNA Topoisomerase I反应后电泳，胶中含*乙锭(EB)时，反应前后DNA带的位置不发生变化。这是因为由DNA Topoisomerase I作用而转换为松散型的DNA受EtBr的影响，再次变为超螺旋状态。因此，使用Topoisomerase I反应后，一般使用不含EB的琼脂糖凝胶电泳，电泳终了后再用EB染色。
➤ 如果在10×添附Buffer中直接加入0.1%小牛血清白蛋白溶液，会产生大量的白色沉淀。因此，在反应液调制时需按以下顺序添加试剂：dH2O→10×反应缓冲液→0.1% BSA→底物DNA。
➤ BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。

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