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- 2025年07月16日
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NanoDrop 2000超微量分光光度计是NanoDrop的最新产品，应用液体的表面张力特性，样品体积只需要0.5~2ul，在检测台上，经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材检测吸收值的优点。此产品设计受专利保护，并在全世界广受欢迎，其准确度与便利性让科学家得以更有效率进行各项研究。
NanoDrop 2000使用高能量氙灯（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光谱检测，且不需要暖机，开机后立即使用。搭配高感度CCD array检测器，检测吸收值可高达300Abs（dsDNA浓度2~15000ng/ul），大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可检测。
待测样品的均质性是NanoDrop 2000的最高要求，一般核酸、蛋白质样品能在检测前以vortex mixer震匀为最佳，若无vortex mixer也应以pipette吸放数次混匀。若担心genomic DNA可能因前述动作而断裂，则改以55ﾟC加热约一分钟，使样品在侦测前呈现均匀状态，以确保2ul 具有代表性。
检测时选择不同检测模式，可以得到最快速的结果：
● Nucleic Acid – 吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm吸收值（换算成10mm光径吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸浓度。
● UV-Vis – 190~840nm间所有波长的吸收值及光谱（以1mm光径吸收值呈现）。
● A280蛋白质定量法– 280nm吸收值（换算成10mm光径吸收值）、260/280 ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质，须具有已知的质量消光系数（mass extinction coefficient）方可计算。
● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果，自动画出标准曲线并计算R square，待测蛋白质浓度。
浓度范围：
| 样品种类 | 最低浓度 | 最高浓度 (超过时请稀释样品) |
再现性(五重复以上) |
| 核酸 | 2 ng/ul | 15000 ng/ul (dsDNA) 12000 ng/ul (RNA) |
浓度范围在2-100 ng/ul 时，SD为± 2 ng/ul 浓度范围大于100 ng/ul 时，CV为± 2% |
| 纯BSA | 0.10 mg/ml | 100 mg/ml | 浓度范围在0.05-10 mg/ml 时，SD为± 0.10 mg/ml 浓度大于10 mg/ml 时，CV为± 2% |
| 蛋白质，以BCA方式定量 | 0.2 mg/ml | 8.0 mg/ml | CV：± 2% （在可侦测的浓度范围内皆然） |
| 蛋白质，以modified Lowry方式定量 | 0.2 mg/ml | 4.0 mg/ml | CV：± 2% （在可侦测的浓度范围内皆然） |
| 蛋白质，以Bradford方式定量 | 100 ug/ml | 8000 ug/ml | 浓度范围在100-500 ug/ml 时，SD为± 25 ug/ml 浓度大于500 ug/ml 时，CV为± 5% |
| 蛋白质，以Mini Bradford方式定量 | 15 ug/ml | 100 ug/ml | 浓度范围在15-50 ug/ml 时，SD为± 4 ug/ml 浓度大于50 ug/ml 时，CV为± 5% |
1、波长范围: 190-840nm
2、波长精度: 1nm
3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm)
4、其它: 1mm光程长度（可自动调整到0.05mm）
5、检测下限：2ng/μl（dsDNA)
6、检测上限：15000ng/μl（dsDNA）
7、吸光率精确度：0.002 absorbance (1mm光程)
8、吸光率准确性：2%(at 0.76 at 257 nm)
9、吸光率范围：0.02-300 (相当于10mm光程)
10、核酸检测周期：< 5s
11、体积：14cm×20cm
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文献和实验1. Qubit 定量与紫外分光光度计定量的区别 在常规实验室对核酸定量的检测中，常会用到紫外分光光度计（或 Nanodrop）和 Qubit 两种检测方法，二者在原理、准确性、操作难易等方面存在显著差异。 ①首先两者原理不同，紫外分光光度计基于核酸的紫外吸收特性来实现对核酸的定量：核酸（DNA/RNA）在 260nm 波长处有特异性吸收峰，且吸光度与核酸浓度成正比；Qubit 基于荧光染料与核酸特异性结合的原理来实现对核酸的定量，两者结合后荧光强度与核酸浓度成正比，通过标准曲线校准实现定量
组 DNA 断裂，进而造成基因组 DNA 残留，此时应按照说明书轻柔翻转操作； ②加入中和缓冲液后，剧烈振荡会造成质粒 DNA 与蛋白交联； ③漂洗时乙醇没有通过离心或者干燥完全去除，从而影响下游的实验。此外避免内毒素残留是转染级以上的质粒需要严格控制的指标，使用 QIAGEN EndoFree Plasmid kit 系列提取质粒，可以把内毒素控制到 0.1EU/ug 以内，并且在操作过程中无需添加额外的操作步骤。 3. Nanodrop 检测数据分析、检测浓度虚高 Nanodrop 检测基本
曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。图1. BCA法蛋白质定量。Cu（BCA）2耦合物在592nm有一很强的吸收值，7700L/mol/cm。近几年开发的一些精密的检测仪器，都可以使用短光程、微量体积的样品进行比色定量，例如NanoDrop（ThermoFisher Scientific）。这个仪器内置了蛋白质280nm直接定量法，这种方法可以有效的避免浪费样品且操作简单。在直接蛋白定量的基础上，这些仪器还发展了蛋白质比色定量法，例如BCA法。通过调整蛋白质和BCA工作缓冲液的相对体积比，由原来的20:1调整
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