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- 2025年10月30日
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文献和实验with differing annealing temperatures（退火温度）; a degenerate primer（兼并引物） is used to amplify in the other direction from the unknown sequence.20、Touch down PCR 降落PCR，是另一种简单的降低非特异性扩增的方法，可规避对PCR循环条件进行耗时的优化实验。降落PCR过程中，首轮循环的退火温度设置在比引物的解链温度高出几度，使每个后续循环的退火温度逐渐降到，直到退火
SDS-PAGE Western Blotting Protocols
-PAGE, although it does reduce the effective size of the resolving gel. 8. Add upper layer of water-saturated n-butanol to the top of the gel. 9. Let polymerize (this takes ~10-15’). 10. Invert gel to remove n-butanol. Touch with filter paper to wick off residual
-PCR技术的改进:改进之一是利用锁定引物((lock docking primer)合成第一链cDNA,即在oligo(dT)引物的3'端引入两个简并的核苷酸【5'-Oligo(dT)16_30MN-3', M=A/G/C;N=A/G/C/T】，使引物定位在poly(A)尾的起始点，从而消除了在合成第一条cDNA链时oligo(dT)与poly(A)尾的任何部位的结合所带来的影响;改进之二是在5‘端加尾时，采用poly(C)，而不是poly(A);改进之三是采用RNase H一莫洛尼氏鼠白血.病毒
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