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- 翌圣生物（Yeasen）
- 10186ES50
- 上海
- 2025年10月16日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye)
- 保质期：
有效期1年
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件：
-20℃保存,避免反复冻融
- 规格：
50T
产品信息
产品描述
全血直接PCR试剂盒是一款可以直接对全血样本进行PCR扩增的试剂盒，无需DNA提取或样品处理，大大降低了污染风险，缩短了检测时间。
试剂盒中包含配方优化的2× Blood Master Mix，具有很强抑制物耐受性，人血的模板最大加入量可达45%，鼠血的可达20%，可以灵敏的扩增血液样本中基因组和外源目的DNA片段。2× Blood Master Mix包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，扩增产物末端加A，适用于Hieff Clone®快速克隆试剂盒（货号：10907ES60/10908ES60）。
该试剂盒可用于直接扩增的血样类型包括：新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血渍，且兼容所有常规抗凝剂（EDTA、柠檬酸盐、肝素等）。适用样本来源包括人血、鼠血、鸡血、鸟血、牛血、狗血等。
产品组分
a）2× Blood Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等，产品已混合溴酚蓝染料（不含SDS），PCR产物可以直接进行电泳。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。避免反复冻融。
操作方法
1. PCR反应体系配制
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a）模板使用量：进行基因组上的目的片段检测，建议使用少量的血液量作为模板；检测血液样本中某种病毒或细菌等的目的片段，建议扩大PCR体系并使用较大量的血液模板。血液模板最多占PCR体系的45%（人血）、20%（鼠血）。若模板使用含有血液的采集卡，可截取直径1-4 mm的血点，直接加入20-50 μL PCR反应体系进行扩增。
b）引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-0.5 μM之间进行调整。
c）反应体系：推荐使用20 μL或 50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR试剂盒 | 10186ES50 | 50 T | 323 |
| Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR试剂盒 | 10186ES70 | 200 T | 983 |
产品描述
全血直接PCR试剂盒是一款可以直接对全血样本进行PCR扩增的试剂盒，无需DNA提取或样品处理，大大降低了污染风险，缩短了检测时间。
试剂盒中包含配方优化的2× Blood Master Mix，具有很强抑制物耐受性，人血的模板最大加入量可达45%，鼠血的可达20%，可以灵敏的扩增血液样本中基因组和外源目的DNA片段。2× Blood Master Mix包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，扩增产物末端加A，适用于Hieff Clone®快速克隆试剂盒（货号：10907ES60/10908ES60）。
该试剂盒可用于直接扩增的血样类型包括：新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血渍，且兼容所有常规抗凝剂（EDTA、柠檬酸盐、肝素等）。适用样本来源包括人血、鼠血、鸡血、鸟血、牛血、狗血等。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
| 10186ES50（50 T） | 10186ES70（200 T） | ||
| 10186-A | 2× Blood Master Mixa | 500 µL | 1 mL× 2 |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。避免反复冻融。
操作方法
1. PCR反应体系配制
| 组分 | 体积（μL） | 体积（μL） | 终浓度 |
| 2× Blood Master Mix | 10 | 25 | 1× |
| Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
| 抗凝全血 | X | X | - |
| ddH2O | To 20 | To 50 | - |
a）模板使用量：进行基因组上的目的片段检测，建议使用少量的血液量作为模板；检测血液样本中某种病毒或细菌等的目的片段，建议扩大PCR体系并使用较大量的血液模板。血液模板最多占PCR体系的45%（人血）、20%（鼠血）。若模板使用含有血液的采集卡，可截取直径1-4 mm的血点，直接加入20-50 μL PCR反应体系进行扩增。
b）引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-0.5 μM之间进行调整。
c）反应体系：推荐使用20 μL或 50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
2. PCR反应条件设置
【注】：a）预变性：95℃，5 min可以让白细胞裂解，释放可用于PCR扩增的基因组DNA。请勿缩短时间或降低温度。
b）退火温度：退火温度设置为引物Tm值即可。然而，使用高的退火温度可以有效减少非特异性扩增，并提高全血模板的扩增效率。因此，如扩增产物特异性较差，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板最适退火温度。
c）延伸时间：按30 sec/kb设定，如不足30 sec，设置30 sec即可。
d）扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。太多的循环将会导致非特异性扩增增加。
3. 扩增产物分析
PCR完成后，建议将反应液于1000× g (大约4000 rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。该步骤可有效去除多种血液组分。当使用高浓度血液模板时此步尤为重要，因为经过PCR循环，反应管中会存在大量的血细胞碎片。这些碎片会干扰下游的检测，如琼脂糖电泳检测。注意：由于血液本身的原因，PCR 结束后在 PCR 管的底部会出现透明凝胶状物质，此为正常现象。
4. 对照反应
在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
4.1 阳性对照反应体系
【注】：a）模板DNA：选用样本纯化的DNA。
b）引物的选择：建议选择该样本较易扩增的基因的引物，如 β-actin 基因或 GAPDH 等。
4.2 阴性对照
PCR反应体系被污染会导致PCR结果出现假阳性，需要设置阴性对照来排除。将使用的移液器枪头浸泡在2× Blood Master Mix中，添加引物，ddH2O进行PCR扩增；另取ddH2O作为模板，用目的基因引物进行PCR扩增，以排除PCR体系是否被污染和实验是否有其他污染源。
注意事项
1. 尽量使用新鲜抗凝血。若冻存血，应避免反复冻融。
2. 解冻后2× Blood Master Mix可能出现浑浊，冰上放置1-2 min，待溶液澄清后，上下颠倒混匀，不影响试剂性能。
3. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题与解决方法
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50℃～65℃ | 20 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
b）退火温度：退火温度设置为引物Tm值即可。然而，使用高的退火温度可以有效减少非特异性扩增，并提高全血模板的扩增效率。因此，如扩增产物特异性较差，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板最适退火温度。
c）延伸时间：按30 sec/kb设定，如不足30 sec，设置30 sec即可。
d）扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。太多的循环将会导致非特异性扩增增加。
3. 扩增产物分析
PCR完成后，建议将反应液于1000× g (大约4000 rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。该步骤可有效去除多种血液组分。当使用高浓度血液模板时此步尤为重要，因为经过PCR循环，反应管中会存在大量的血细胞碎片。这些碎片会干扰下游的检测，如琼脂糖电泳检测。注意：由于血液本身的原因，PCR 结束后在 PCR 管的底部会出现透明凝胶状物质，此为正常现象。
4. 对照反应
在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
4.1 阳性对照反应体系
| 组分 | 体积（μL） | 体积（μL） | 终浓度 |
| 2× Blood Master Mix | 10 | 25 | 1× |
| Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
| 模板DNA | X | X | 100-200 ng |
| ddH2O | To 20 | To 50 | - |
b）引物的选择：建议选择该样本较易扩增的基因的引物，如 β-actin 基因或 GAPDH 等。
4.2 阴性对照
PCR反应体系被污染会导致PCR结果出现假阳性，需要设置阴性对照来排除。将使用的移液器枪头浸泡在2× Blood Master Mix中，添加引物，ddH2O进行PCR扩增；另取ddH2O作为模板，用目的基因引物进行PCR扩增，以排除PCR体系是否被污染和实验是否有其他污染源。
注意事项
1. 尽量使用新鲜抗凝血。若冻存血，应避免反复冻融。
2. 解冻后2× Blood Master Mix可能出现浑浊，冰上放置1-2 min，待溶液澄清后，上下颠倒混匀，不影响试剂性能。
3. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 | |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
| 阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 | 血液样本保存不当，基因组DNA降解。 | 抗凝全血可在4℃保存2-8天，需长时间保存可将样本置于在-20℃或-70℃冻存，并避免反复冻融。 |
| 模板加入量不适合。 | 可在PCR体系10%-30%范围内优化血液加入量；若是扩增血液样本中的病毒或细菌DNA片段，可将模板量增加至30%-40%。 | |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
| 非特异性扩增 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
| 阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
HB190220
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全血直接PCR试剂盒 Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye)
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