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- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海
- 10180ES50
- 2025年10月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃保存，避免反复冻融。
- 保质期：
有效期1年
- 英文名：
Animal Tissue Direct PCR Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
50T
该试剂盒可用于转基因型鉴定、动物基因分型等。
产品组分
| 类别 | 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | 储存 | |
| 10180ES50（50T） | 10180ES70（200T） | ||||
| Part I | 10180-A | Buffer AL | 5mL | 20mL | 室温或4℃ |
| 10180-B | Protease | 220μL | 880μL | 4℃ | |
| 10180-C | 6× DNA Loading Buffera | 375μL | 1.5mL | 4℃或-20℃ | |
| Part II | 10180-D | 2× Tissue Master Mixb | 500μL | 2 × 1mL | -20℃ |
b）2× Tissue Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。
运输方法
冰袋运输。
保存方法
1. 试剂10180-A【Buffer AL】，在常温干燥条件下，可保存12个月，如需保存更长时间可置于4℃。低温保存，易出现沉淀，可平衡至室温或37℃水浴10min，待沉淀溶解后，混匀使用。2. 试剂10180-B【Protease】，具有独特配方，为保证其更好的活性和稳定性，建议4℃保存，切勿置于-20℃。
3. 试剂10180-C【6× DNA Loading Buffer】，可置于4℃或-20℃长期保存。
4. 试剂10180-D【2× Tissue Master Mix】，-20℃保存，避免反复冻融。
操作方法
样品基因组DNA释放1. 在离心管中加入100μL Buffer AL，4μL Protease，轻轻涡旋混匀。
【注】：Buffer AL与Protease混合后尽快使用，不宜长期保存。
2. 取5-10mg动物组织，置于上述离心管中，轻轻涡旋混匀。
【注】：组织应尽量剪碎，以便酶解反应更顺利进行。
3. 65℃孵育10-30min，然后95℃处理5min。
【注】：65℃孵育，一般10min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难酶解，可将时间延长至30min。组织块不需完全酶解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
4. 12000rpm离心5min。
5. 将上清转移至新的离心管，4℃或-20℃保存或直接用于PCR扩增。
PCR反应鉴定——PCR反应体系
| 组分 | 体积（μL） | 体积（μL） | 终浓度 |
| 2× Tissue Master Mix | 10 | 25 | 1× |
| Forward Primer (10μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25μM |
| Reverse Primer (10μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25μM |
| 裂解产物（DNA模板） | 2 | 5 | - |
| ddH2O | To 20 | To 50 | - |
a）模板使用量：建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%。
b）引物终浓度：0.2-0.25μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
c）反应体系：推荐使用20μL或50μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
e）对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
PCR反应鉴定——PCR反应条件
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30sec/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min | 1 |
b）延伸时间：需要根据片段的长度来确定，对于1kb以内的DNA片段，建议延长时间为30sec。
注意事项
1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。2. 试剂Buffer AL若低温保存，易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀，混匀后再使用。
3. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
常见问题与解决方法
| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
| 阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 | |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
| 阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
| 加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系，或减少裂解液的用量。 | |
| 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
| 模板加入量不适合。 | 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。 | |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
| 非特异性扩增 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
| 阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
| 样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的NaClO溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
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文献和实验[2] Pan Y, Fang G, Wang Z, et al. Chromosome-level genome reference and genome editing of the tea geometrid. Mol Ecol Resour. 2021;21(6):2034-2049. doi:10.1111/1755-0998.13385(IF:7.090)
[3] Sun X, Zhang K, Gu J, et al. The biological characters of Bmelav-like genes in the development of Bombyx mori. Insect Mol Biol. 2021;30(1):9-17. doi:10.1111/imb.12668(IF:2.533)
for 60 minutes. 5) Add 100 μl FP3 Buffer and vortex to mix. 6) Store the extraction at 2-8°C. 2. PCR Protocol This protocol serves as a guideline for PCR amplification. Optimal reaction conditions, such as incubation times
is covered by the Extraction Solution. 2) Incubate at 56°C for 1 hours. 3) Incubate at 95°C for 5 minutes. 4) Add 50 -100 μl PS3 Buffer and vortex to mix. 5) Store the extraction at 2-8°C. 3. PCR Protocol
of tissue/ cell harvest. Dynabeads® mRNA DIRECT™ Kit protocols can be scaled up or down to suit specific sample source and quantity. Please see section "Sample Guidelines and Scaling" before preparing the sample, and for recommended bead and buffer volumes
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