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大量
- 保质期:
一年
- 供应商:
钦诚生物
- 保存条件:
4°保存
- 规格:
50次
本产品是无酚无氯仿柱式植物 RNAOUT(CAT#:160906)的升级产品。经过配方和流程优化后,不仅不需要氯仿处理,还解决了提取的植物总 RNA 中出现基因组 DNA 污染这一难题,提取的 RNA 通过 PCR 验证不含基因组DNA 污染。该产品特点如下:
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| 成 份 | 编 号 | 50 次大纸盒包装 | |||
| 溶液 A | 160907A | 50 mL | |||
| 溶液 B | 160907B | 50 mL | |||
| 离心吸附柱 | 60911 | 50 套 | |||
| 通用洗柱液 | 60408 | 100 mL | |||
| 膜反应液 | 90404E | 2.5 mL | |||
| RNase-free DNase(1U/uL) | 90903 | 0.5 mL | |||
| RNA 洗脱液 | 71207 | 10 mL | |||
| 使用手册 | 1 份 | ||||
| 常温运输,4℃保存,DNase 低温运输保存,有效期一年。 | |||||
| 无 | |||||
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- 将匀浆物或研磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份,匀浆液会 多于 1 mL,转移时也只取 1 mL。
- 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟,管底沉淀为细胞破碎物。
- 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。
- 加入等体积的溶液 B,充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物,属于正常现象),千万不要去掉沉淀,一定要把所有的混合物上柱。
- 将一半的溶液( 如果有沉淀, 则先混匀) 转移到离心吸附柱中, 13000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。
- 将剩下的一半溶液(如果有沉淀,则先混匀)转移到同一离心吸附柱中, 13000-15000 g 室温离心半分钟,弃穿透液。
- 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可,但如 果在第 7 步加入溶液 B 后有沉淀产生,则需要洗三次,每次加入的通用洗涤液的量分别为 0.4、0.3 和 0.3 mL。
- 12000 rpm 室温离心 10 秒以便去除残留液体。此步很重要,否则残留的通用洗柱液会抑制后续反应中 DNase 的活性。
- 将 10 uL(10 U)的 RNase-free DNase 加入到 50 uL 37℃预热的 DNA 膜反应液中,吹打混匀配制成 DNase 工作液。
- 将 DNase 工作液在 37℃预热 1 分钟,然后全部加入到离心吸附柱中,室温放置 5 分钟。注意:5 分钟一般足够降解大多数情况下的 DNA 污染。如果 DNA 没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质抑制了 DNase 的活性),此步的保温时间可以适当延长到 10 分钟或 15 分钟。
- 直接在离心吸附柱中加 0.7 mL 通用洗柱液,盖上盖后颠倒数次混匀。
- 12000 rpm 室温离心半分钟,弃穿透液。
- 再加 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000 rpm 室温离心半分钟, 弃穿透液。
- 12000 rpm 室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇(通用洗柱液中的成分)会影响 RNA 的使用。
- 将离心吸附柱转移到RNase-free 收集管中,加入30-50 uL RNA 洗脱液, 室温放置 1-2 分钟。
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文献和实验在 RIPA 不可溶组分中,如果样品又是研磨困难的组织样品,则优先选择对膜蛋白和小分子量蛋白提取效率更高且不需要匀浆仪的 Invent 柱式法工具进行总蛋白提取[1]。 * 目标蛋白在某个特定细胞器上(内质网,高尔基体,溶酶体,线粒体,内体等)表达,且蛋白表达量较低,若用总蛋白检测时条带较弱,则推荐使用 Invent 柱式法工具富集特定细胞器蛋白后再检测,提高检出效率。 * 研究蛋白定位或研究蛋白转运过程,推荐使用 Invent 柱式法工具进行细胞组分分离,将样品分离为不同组分如分成细胞核,细胞浆,细胞
裂解液配方:100 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,5% β-巯基乙醇 (随用随加), 实验步骤: (1) 取 1-50 g 新鲜植物材料,于液氮中研成粉。 (2) 将冻粉转入预冷的离心管中,立即加入等体积 (w/v) 2×CTAB 提取缓冲液,65℃ 保温 10-20 分钟,其间不时摇动。 (3) 加入等体积的氯仿/异戊醇,轻缓颠倒离心管混匀,室温下,12000r
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