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- 2026年01月08日
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qPCR检测实验
服务介绍
qPCR即实时荧光定量PCR，是一种以SYBR Green染料法/Taqman探针法进行相对定量的检测服务，即用已知管家基因做为内参照，根据目的基因和管家基因的相对表达作为定量的最后结果。该技术具有准确度，灵敏度高等特点。qPCR现已成为一种成熟的mRNA、microRNA、lncRNA等定量手段。其中，Sybr-Green法因为使用方便、价格低廉（相对于Taqman探针法）而被广泛使用。
客户提供
1. 确定待检测的基因名称，Gene ID及基因类型（mRNA / microRNA / lncRNA等）；
2. 提供待检测的样品（细胞样品：细胞数量>106；组织样品：组织总量>100 mg；血清样品>200ul，避免提供带有红色溶血的血清样本）；
最后交付
完整的实验报告包括试剂耗材，厂家货号，实验步骤及实验结果等。
参考文献
1. Kubista M, et al. The real-time polymerase chain reaction. Mol Aspects Med. 2006, 27(2–3): 95–125.
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文献和实验荧光定量 PCR 的常见异常结果除了扩增曲线异常、融解曲线异常两类常见情况外，qPCR 实验中通常还会遇到以下三大类情况： 1. 复孔间重复性差怎么办？ 复孔间重复性差一般会有以下两种情况： （1）CT 值很大，如 CT≥ 30，重复性差属于正常现象。该现象符合泊松分布，即在有效模板量很少的情况下，模板与引物的碰撞存在随机性，直接导致复孔间的 CT 值差异较大。 解决方法：如果融解曲线没有杂峰，无模板阴性对照同目的基因的 △CT 值为 3 or 5 以上，那 CT 值为准确的，可多设置
在上一篇文章《没有 CT 值，我的 QPCR 实验失败了吗？（上）》中，小编给大家讲述了 CT 值是什么，它是如何产生的，并分析了一些没有扩增曲线导致无法计算 CT 值的案例。但除此之外，有的时候也会出现有扩增曲线，但没有 CT 值的情况。我们今天的这篇文章就继续分析有扩增曲线，但没有 CT 值的一些案例。 情况三：有扩增曲线 有扩增曲线的情况也可以分为两类：有正常的扩增曲线和异常的扩增曲线。 案例 5： 有时候我们会发现明明扩增曲线是正常的，但却没有 CT 值。比如在图 7A 这个案例中
程序中，循环中退火延伸步骤是默认采集荧光信号的，所以大家如果要修改默认程序，一定要注意采集信号的图标是否是点亮的。 以上几个案例中，没有 CT 值的原因都是由于没有扩增曲线导致无法计算 CT 值，还有一些案例是有扩增曲线，但没有 CT 值的。由于篇幅关系，小编把这些案例放到了下一篇里，请大家继续关注我们，期待《没有 CT 值，我的 QPCR 实验失败了吗？（下）》。
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