- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC1453
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
产品名称：DH5αλpir大肠杆菌。E. coli DH5α λpir strain contains the pir gene (lysogenized lpir phage lysogen) and is designed for cloning and propagation of plasmids with R6K origin of replication sequence (like pUTmini-Tn5 vectors). To transfer this plasmids directly from DH5α λpir donor strain to the recipient strain it is necessary to perform a triparental mating with a helper strain such as E. coli DH5α (pRK2013) (see Helper E. coli strains). The genotype of the strain is sup E44, ΔlacU169 (ΦlacZΔM15), recA1, endA1, hsdR17, thi-1, gyrA96, relA1, λpir phage lysogen.
质粒图谱
DH5αλpir大肠克隆菌（有kan，做结合转移实验未成功）使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
DH5αλpir大肠克隆菌（有kan，做结合转移实验未成功）注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验。建议首次拿到引物时，对模板浓度、Tm 值进行梯度测试，最终摸索出合适的扩增条件； 解决方案： 首先检查阳性对照（如已知成功扩增的模板 + 引物），排除试剂和仪器问题；如果阳性对照正常，逐步排查以下条件：模板质量→引物特异性→反应体系（Mg²⁺、酶）→程序参数（退火温度、循环数）；针对复杂模板，可尝试选择高品质 PCR 酶、 「梯度测试」（模板浓度、退火温度），快速定位最优条件。 7. 胶回收效率低？如何提高？ 胶回收效率低是分子克隆中常见的问题，可能与电泳操作、切胶、溶胶、结合、洗涤
法，在涂布有IPTG和X-Gal的筛选平板上，重组菌株为白色，未转入重组质粒的菌株为蓝色。 ◆ 可对小量提取的质粒DNA做限制性酶切，采用天为时代公司的质粒提取试剂盒，可快速提取多个样本，而且由于提取的质粒纯度高，不会有酶切切不开，影响实验的情况。 ◆ 也可直接用细菌菌落进行PCR反应，筛选存在目的片段的重组菌落。天为时代公司生产的一管便捷式PCR反应系统（MasterMix系列产品）特别适合这种方法。用灭菌的吸头挑取单个菌落到已加入MasterMix的PCR管中，加入特异引物，进行
厂家 载体pCDNA3.1 Transheep 大肠杆菌菌株DH5α Tiangen 限制性内切酶 Fermentas T4连接酶 Fermentas 质粒DNA小,大量抽提试剂盒 Axygen 凝胶
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