- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC0524
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
| 质粒标签: | 反式lac 抑制子 |
|---|---|
| 原核抗性: | 卡那霉素Kanamycin |
| 克隆菌株: | DH5α |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
质粒图谱
pREP4质粒(大肠杆菌用的)使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pREP4质粒(大肠杆菌用的)注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验mnidr 请问最早的质粒是在哪发现的？原始的野生型大肠杆菌是不是没有质粒？我做实验用试剂盒提质粒有的大肠杆菌就提不出。 多谢 freecell 1946年，莱德伯格(Lederburg)和塔特姆(Tatum)发现的F因子是最早发现的质粒，1952年，由Lederburg正式命名为质粒。 确切地讲，质粒是细菌内的共生遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并赋予宿主细胞一些表型，例如对抗
需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上，或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒，一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。 内容来源：QIAGEN 凯杰
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
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