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- 钦诚生物
- 上海
- QC0946
- 2025年07月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
pLV-CiR慢病毒环状RNA质粒
基本信息
质粒分类: 哺乳细胞载体；RNA环状表达质粒
质粒图谱
pLV-CiR慢病毒环状RNA质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pLV-CiR慢病毒环状RNA质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验一 miRNA成熟及作用方式（Mikhailidis DP, Athyros VG. Nat Rev Cardiol. 2014 Feb;11(2):72-4.） miRNA过表达：将miRNA前体序列构建入病毒载体中，该载体既可用于瞬时转染细胞，也可以包装成病毒用于稳定株筛选和动物水平过表达miRNA。 miRNA敲低：设计针对miRNA的TuD RNA封闭片段或海绵片段，再将该片段构建入病毒载体中。该载体除了可以直接瞬时转染细胞用于miRNA的敲低，也可以包装成慢病毒，用于动物水平敲低miRNA
、pLO-ciR 和 PLCDH-ciR 三种 circRNAs 表达载体，适用于普通真核表达，慢病毒包装，绿色荧光和嘌呤霉素筛选等多种用途。该载体含有吉赛生物专利技术的 circRNAs 环化表达框架，载体转染细胞后可通过 RNA 剪切形成 circRNAs 分子。研究者仅需以 PCR 扩增目标 circRNAs 的线性序列，克隆进表达载体中即可，大大简化实验步骤，节约时间。 应用 circRNAs 表达载体构建 100 多个目标 circRNAs 的过表达载体，并在 HEK293、SH
circRNA 过表达 敲除 怎么设计？成环机制决定你的靶点在哪
的功能研究主要走两条线：一是当 miRNA 海绵（ceRNA），靠它稳定的环状结构高效吸附 miRNA、解除对靶基因的压制；二是结合转录因子调控转录。无论哪条线，过表达看表型、干扰验证必要性、敲除从成环源头否定，三者配合起来逻辑才闭环。体内实验要是挂荧光，慢病毒或 AAV 带 ZsGreen1 的 circRNA 载体可以直接用。 实验前 1 分钟检查 目标是过表达、敲低还是敲除，科学问题是否匹配 是否准备必要的阴性/阳性/救援或突变对照 验证是否覆盖DNA/RNA/蛋白/功能中的关键层级 载体
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
