pET-GST大肠表达质粒

基本信息

启动子:	T7
复制子:	ColE1 ori，F1 ori
终止子:	T7 terminator
质粒分类:	大肠杆菌载体；PET系列表达质粒
质粒大小:	3.7kb
质粒标签:	N-GST,C-6×His，N-P3C
原核抗性:	氨苄青霉素Amp
克隆菌株:	大肠杆菌DH5α
培养条件:	37℃，有氧，LB
表达宿主:	BL21(DE3)
培养条件:	37℃，有氧，LB
诱导方式:	IPTG或乳糖及其类似物
5'测序引物:	T7:TAATACGACTCACTATAGGG
3'测序引物:	T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG

质粒简介

        pET—GST表达载体采用T7启动子和GST融合表达，同时选用人鼻病毒14亚型3C蛋白酶专一性切割位点。此外，C端还添加了6个His，便于采用chelating sepharose亲和层析。本载体表达的融合蛋白可采用吸附GST的亲和层析和6个His的chelating sepharose双重亲和层析，极大地方便了下游纯化。GST融合表达背景文献在medline里极为丰富，有数百个基因采用GST融合表达成功。

质粒图谱

质粒序列

pET-GST部分序列，仅供参考            877 bp ds-DNA     linear   UNA 05-MAR-2019
DEFINITION  natural linear DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..877
                     /organism="unspecified"
                     /mol_type="genomic DNA"
     promoter        51..69
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             115..768
                     /codon_start=1
                     /product="glutathione S-transferase from Schistosoma 
                     japonicum"
                     /label=GST
                     /translation="MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKK
                     FELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY
                     GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVL
                     YMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK"
     CDS             790..813
                     /codon_start=1
                     /product="recognition and cleavage site for human 
                     rhinovirus 3C and PreScission proteases"
                     /label=HRV 3C site
                     /translation="LEVLFQGP"
     CDS             841..858
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HHHHHH"
BASE COUNT         255 a         176 c         189 g         256 t
ORIGIN
        1 tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca ggatctcgat cccgcgaaat taatacgact
       61 cactataggg agaccacaac ggtttccctc tagatcacac aggaaacagt attcatgtcc
      121 cctatactag gttattggaa aattaagggc cttgtgcaac ccactcgact tcttttggaa
      181 tatcttgaag aaaaatatga agagcatttg tatgagcgcg atgaaggtga taaatggcga
      241 aacaaaaagt ttgaattggg tttggagttt cccaatcttc cttattatat tgatggtgat
      301 gttaaattaa cacagtctat ggccatcata cgttatatag ctgacaagca caacatgttg
      361 ggtggttgtc caaaagagcg tgcagagatt tcaatgcttg aaggagcggt tttggatatt
      421 agatacggtg tttcgagaat tgcatatagt aaagactttg aaactctcaa agttgatttt
      481 cttagcaagc tacctgaaat gctgaaaatg ttcgaagatc gtttatgtca taaaacatat
      541 ttaaatggtg atcatgtaac ccatcctgac ttcatgttgt atgacgctct tgatgttgtt
      601 ttatacatgg acccaatgtg cctggatgcg ttcccaaaat tagtttgttt taaaaaacgt
      661 attgaagcta tcccacaaat tgataagtac ttgaaatcca gcaagtatat agcatggcct
      721 ttgcagggct ggcaagccac gtttggtggt ggcgaccatc ctccaaaatc ggacagcatg
      781 ccagactctc tcgaagttct gtttcagggt ccagcaggat ccgcagaatt cagcgctagc
      841 caccatcatc atcatcatta agcttgatcc ggctgct