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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
2年
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
2UG/5UG
| 规格: | 2UG | 产品价格: | ¥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5UG | 产品价格: | ¥1500.0 |
基本信息
| 别名: | NM_000537.3,HNFJ2 |
|---|---|
| 质粒分类: | 基因文库质粒 |
| 原核抗性: | 壮观霉素Spe |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | 37℃ |
| 5'测序引物: | M13F |
| 3'测序引物: | M13R |
质粒简介
pENTR223-REN(NM_000537.3) 是一个人cDNA基因克隆质粒。Homo sapiens renin (REN), mRNA.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4008 bp ds-DNA circular SYN 08-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4008
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 88..115
/label=rrnB T2 terminator
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 207..293
/gene="Escherichia coli rrnB"
/label=rrnB T1 terminator
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
protein_bind 389..488
/gene="mutant version of attL"
/label=attL1
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
misc_feature 488..1707
/label=REN
protein_bind complement(1707..1806)
/gene="mutant version of attL"
/label=attL2
/bound_moiety="LR Clonase(TM)"
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
promoter complement(1824..1842)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 2294..3085
/codon_start=1
/gene="aadA"
/product="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy,
1985)"
/label=Spe
/note="confers resistance to spectinomycin and
streptomycin"
/translation="MREAVIAEVSTQLSEVVGVIERHLEPTLLAVHLYGSAVDGGLKPH
SDIDLLVTVTVRLDETTRRALINDLLETSASPGESEILRAVEVTIVVHDDIIPWRYPAK
RELQFGEWQRNDILAGIFEPATIDIDLAILLTKAREHSVALVGPAAEELFDPVPEQDLF
EALNETLTLWNSPPDWAGDERNVVLTLSRIWYSAVTGKIAPKDVAADWAMERLPAQYQP
VILEARQAYLGQEEDRLASRADQLEEFVHYVKGEITKVVGK"
rep_origin 3178..3766
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaata cgcgtaccgc
61 tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta
121 gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc
181 acaacgttca aatccgctcc cggcggattt gtcctactca ggagagcgtt caccgacaaa
241 caacagataa aacgaaaggc ccagtcttcc gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg
301 gcagttccct actctcgcgt taacgctagc atggatgttt tcccagtcac gacgttgtaa
361 aacgacggcc agtcttaagc tcgggcccca aataatgatt ttattttgac tgatagtgac
421 ctgttcgttg caacaaattg ataagcaatg cttttttata atgccaactt tgtacaaaaa
481 agttggcatg gatggatgga gaaggatgcc tcgctgggga ctgctgctgc tgctctgggg
541 ctcctgtacc tttggtctcc cgacagacac caccaccttt aaacggatct tcctcaagag
601 aatgccctca atccgagaaa gcctgaagga acgaggtgtg gacatggcca ggcttggtcc
661 cgagtggagc caacccatga agaggctgac acttggcaac accacctcct ccgtgatcct
721 caccaactac atggacaccc agtactatgg cgagattggc atcggcaccc caccccagac
781 cttcaaagtc gtctttgaca ctggttcgtc caatgtttgg gtgccctcct ccaagtgcag
841 ccgtctctac actgcctgtg tgtatcacaa gctcttcgat gcttcggatt cctccagcta
901 caagcacaat ggaacagaac tcaccctccg ctattcaaca gggacagtca gtggctttct
961 cagccaggac atcatcaccg tgggtggaat cacggtgaca cagatgtttg gagaggtcac
1021 ggagatgccc gccttaccct tcatgctggc cgagtttgat ggggttgtgg gcatgggctt
1081 cattgaacag gccattggca gggtcacccc tatcttcgac aacatcatct cccaaggggt
1141 gctaaaagag gacgtcttct ctttctacta caacagagat tccgagaatt cccaatcgct
1201 gggaggacag attgtgctgg gaggcagcga cccccagcat tacgaaggga atttccacta
1261 tatcaacctc atcaagactg gtgtctggca gattcaaatg aagggggtgt ctgtggggtc
1321 atccaccttg ctctgtgaag acggctgcct ggcattggta gacaccggtg catcctacat
1381 ctcaggttct accagctcca tagagaagct catggaggcc ttgggagcca agaagaggct
1441 gtttgattat gtcgtgaagt gtaacgaggg ccctacactc cccgacatct ctttccacct
1501 gggaggcaaa gaatacacgc tcaccagcgc ggactatgta tttcaggaat cctacagtag
1561 taaaaagctg tgcacactgg ccatccacgc catggatatc ccgccaccca ctggacccac
1621 ctgggccctg ggggccacct tcatccgaaa gttctacaca gagtttgatc ggcgtaacaa
1681 ccgcattggc ttcgccttgg cccgctgccc aactttcttg tacaaagttg gcattataag
1741 aaagcattgc ttatcaattt gttgcaacga acaggtcact atcagtcaaa ataaaatcat
1801 tatttgccat ccagctgata tcccctatag tgagtcgtat tacatggtca tagctgtttc
1861 ctggcagctc tggcccgtgt ctcaaaatct ctgatgttac attgcacaag ataaaaatat
1921 atcatcatgc ctcctctaga ccagccagga cagaaatgcc tcgacttcgc tgctgcccaa
1981 ggttgccggg tgacgcacac cgtggaaacg gatgaaggca cgaacccagt ggacataagc
2041 ctgttcggtt cgtaagctgt aatgcaagta gcgtatgcgc tcacgcaact ggtccagaac
2101 cttgaccgaa cgcagcggtg gtaacggcgc agtggcggtt ttcatggctt gttatgactg
2161 tttttttggg gtacagtcta tgcctcgggc atccaagcag caagcgcgtt acgccgtggg
2221 tcgatgtttg atgttatgga gcagcaacga tgttacgcag cagggcagtc gccctaaaac
2281 aaagttaaac atcatgaggg aagcggtgat cgccgaagta tcgactcaac tatcagaggt
2341 agttggcgtc atcgagcgcc atctcgaacc gacgttgctg gccgtacatt tgtacggctc
2401 cgcagtggat ggcggcctga agccacacag tgatattgat ttgctggtta cggtgaccgt
2461 aaggcttgat gaaacaacgc ggcgagcttt gatcaacgac cttttggaaa cttcggcttc
2521 ccctggagag agcgagattc tccgcgctgt agaagtcacc attgttgtgc acgacgacat
2581 cattccgtgg cgttatccag ctaagcgcga actgcaattt ggagaatggc agcgcaatga
2641 cattcttgca ggtatcttcg agccagccac gatcgacatt gatctggcta tcttgctgac
2701 aaaagcaaga gaacatagcg ttgccttggt aggtccagcg gcggaggaac tctttgatcc
2761 ggttcctgaa caggatctat ttgaggcgct aaatgaaacc ttaacgctat ggaactcgcc
2821 gcccgactgg gctggcgatg agcgaaatgt agtgcttacg ttgtcccgca tttggtacag
2881 cgcagtaacc ggcaaaatcg cgccgaagga tgtcgctgcc gactgggcaa tggagcgcct
2941 gccggcccag tatcagcccg tcatacttga agctagacag gcttatcttg gacaagaaga
3001 agatcgcttg gcctcgcgcg cagatcagtt ggaagaattt gtccactacg tgaaaggcga
3061 gatcaccaag gtagtcggca aataaccctc gagccaccca tgaccaaaat cccttaacgt
3121 gagttacgcg tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg
3181 agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc
3241 ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag
3301 cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa
3361 gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc
3421 cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc
3481 gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta
3541 caccgaactg agatacctac agcgtgagca ttgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag
3601 aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct
3661 tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga
3721 gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc
3781 ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt
3841 atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg
3901 cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcccaatacg
3961 caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggca
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文献和实验浓度不同,两种引物浓度相差 100 倍。在最初 20 各循环中,主要产物是双链 DNA。当低浓度引物被耗尽后,高浓度引物引导的 PCR 就会产生大量单链 DNA,单链 DNA 可用于序列测定。 三、主要试剂 1. DNA 模板(1ng/μL)(质粒 R-pGEX-4T-1,R 指代外源基因) 2. 2.5mmol/LdNTP (TaKaRa) 3. 10×PCR 缓冲液(TaKaRa) 4. 25mmol/L MgCl 2 (TaKaRa) 5. 引物 1、引物 2(5pmol/μL) 引物
对照的siRNA应该和选中的siRNA序列有相同的组成,但是和mRNA没有明显的同源性.通常的做法是将选中的siRNA中的碱基序列打乱.当然,同样要保证它和其他基因没有同源性.3、RNAi表达载体的选用化学合成与体外转录方法都是在体外得到siRNA后再导入细胞内,但是这两种方法主要有两方面无法克服的缺点:siRNA进入细胞后容易被降解;进入细胞siRNA在细胞内的 RNAi效应持续时间短.针对这种情况,出现了质粒、病毒类载体介导的siRNA体内表达.该方法的基本思路是:将siRNA对应的DNA双链模板
的上下游两端的序列连接起来,从而实现了目的基因的敲除。再如,可为细胞提供一个修复的模板质粒,这样细胞就可按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变。也可对受精卵细胞进行基因编辑,并将其导入代孕母体中,可实现基因编辑动物模型的构建。
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