pENTR1A质粒

Gateway技术：克隆、表达新方法

TOPO克隆提供高效的一步法克隆策略，可以定向克隆平端PCR产物到入门载体。平端PCR产物定向克隆的效率>90%，从而简化了筛选。同时不再需要连接酶、PCR后续步骤或者限制性内切酶。目前有两种定向TOPO克隆载体。pENTR/D-TOPO 和pENTR/SD/ D-TOPO（表2和图3）有以下特点：  位于PCR产物插入位点两侧的attL重组位点可以与Gateway目的载体进行有效重组  通用M13位点便于测序  基于pUC的ori位点提供高产量质粒  大肠杆菌中卡那霉素（kanamycin

【求助】一个关于基因改造的问题，希望各位站友帮帮忙！祝各位国庆快乐！

significantly affected compared with those in wild-type mice。 woxingwosu 没有看原文的方法，只能根据你的文字试着回答一下。 问题1： 文章是通过转基因的办法把这个RUNX2转到小鼠里面从而达到过表达这个蛋白的作用。做法可能是构建一个质粒，把Col1a1启动子（这个启动子应该是在小鼠能够有很强的启动作用）和RUNX2基因（放在col1a1启动子下游）连接在这个质粒里。构建好质粒后把它注射到小鼠

腺病毒能在293中复制吗？

腺病毒可以在293A细胞中进行转录，表达并可进行包装复制出大量高滴度病毒。293T是一种逆转录包装表达细胞，我做过也可进行表达，但还没有具体鉴定表达后的病毒是否可用。293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒（Ad 5）DNA的永生化细胞，表达转染的腺病毒5的基因。细胞来源都是人肧肾上皮细胞，293T细胞表达E1A蛋白，SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。293FT细胞能制造高滴度的慢病毒。293A细胞来源于人肾纤维母细胞，组成性表达E1A 和E1B 蛋白