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晶莱生物
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稳转细胞株
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样本/基因
分类:瞬时转染(transient gene expression, TGE)和稳定转染(stable gene expression,SGE)两种。
瞬时转染
指外源 DNA或RNA 转入宿主细胞后不整合到宿主染色体中进行外源目的基因的表达。
特点:
1.目的基因未整合到染色体上,超螺旋质粒DNA有较高的转染效率;
2.转染24h-72h后常需要用到一些报告系统如荧光蛋白、β半乳糖苷酶等来帮助检测;
3.表达持续时间48-72h,随细胞分裂而稀释直至丢失;
4.用于快速分析:如基因产物短期表达、蛋白质小规模表达纯化。
稳定转染
指外源DNA转入宿主细胞后将外源目的基因整合到宿主染色体中进行表达。
特点:
1.目的基因整合到染色体上,需要使用线性DNA(线性DNA虽然比超螺旋状的DNA转入量低,但整合率高);
2.外源DNA整合到宿主细胞染色体中大约为1%,通常需要通过一些选择性标记反复筛选,才能得到稳定转染的同源细胞系。
3.随宿主细胞基因组复制、转录、翻译,并被稳定遗传;
4.用于获得稳定表达的外源基因的单细胞克隆:如大规模蛋白质的合成,长期的药理学研究遗传机制的研究等。
细胞侵染图片
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文献和实验日前,北京大学生命科学学院魏文胜课题组在 Cell 杂志上在线发表题为“Circular RNA Vaccines against SARS-CoV-2 and Emerging Variants”的研究论文。 魏文胜团队首先建立了体外高效制备高纯度环状 RNA 的技术平台,针对新型冠状病毒及其变异株,设计了编码新冠病毒刺突蛋白(Spike)受体结构域(RBD)的环状 RNA 疫苗。 该项研究中制备的针对新冠病毒德尔塔变异株的环状 RNA 疫苗(circRNARBD
这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系,可以构建表达细胞系,也能构建敲降细胞系,经常有人问我什么叫稳转和顺转的区别。瞬转细胞系,一般情况下能够稳定表达最多长一周左右,而稳转细胞系,只要构建成功就能稳定表达,没有时间限制,但是也不是肯定的,一般实验构建的细胞系超过 10 代以后,这个细胞系就有可能不靠谱了。接下来,咱们讲讲稳转细胞系的构建。一般来讲 shRNA 用的是 HIV 病毒,虽然已经经过处理,但是一听这名字也觉得渗人,无论如何保护自己是在实验室永葆青春的基础,所以一定
的一种即可!是的,你没有看错,只要一种!方案概述:第一年 4 个地方,每个地方分别种植 5000 株 Shoepeg(玉米的一个地方品种),每个地方随机挑选 96 株进行基因型和表型分析。按照表型分别挑选两个地方 5% 极端高和矮的单株。第二年将 4 个地方分别挑选的极端个体在相同的地方再分别种 5000 株。然后分别从高和矮的两个种植点分别随机各挑选 96 个极端个体进行表型鉴定和 BSA 测序分析。GWAS+BSA 定位玉米株高 QTLGWAS 和 BSA 对玉米株高定位结果(其中 GWAS
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