稳转细胞株

稳转细胞株

稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。

分类：瞬时转染（transient gene expression, TGE）和稳定转染(stable gene expression，SGE)两种。

瞬时转染
指外源 DNA或RNA 转入宿主细胞后不整合到宿主染色体中进行外源目的基因的表达。

特点：
1.目的基因未整合到染色体上，超螺旋质粒DNA有较高的转染效率；
2.转染24h-72h后常需要用到一些报告系统如荧光蛋白、β半乳糖苷酶等来帮助检测；
3.表达持续时间48-72h,随细胞分裂而稀释直至丢失；
4.用于快速分析:如基因产物短期表达、蛋白质小规模表达纯化。

稳定转染
指外源DNA转入宿主细胞后将外源目的基因整合到宿主染色体中进行表达。

特点：
1.目的基因整合到染色体上，需要使用线性DNA（线性DNA虽然比超螺旋状的DNA转入量低，但整合率高）；
2.外源DNA整合到宿主细胞染色体中大约为1%，通常需要通过一些选择性标记反复筛选，才能得到稳定转染的同源细胞系。
3.随宿主细胞基因组复制、转录、翻译，并被稳定遗传；
4.用于获得稳定表达的外源基因的单细胞克隆：如大规模蛋白质的合成，长期的药理学研究遗传机制的研究等。
 

实验步骤

结果展示

细胞侵染图片