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逆转录病毒包装/逆转录病毒载体/Retrovirus

逆转录病毒包装/逆转录病毒载体/Retrovirus
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和元生物技术(上海)股份有限公司
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产品详情

简介: 和元生物可以提供高滴度逆转录病毒,满足各类科研实验需求
提供商: 和元上海
服务名称: 逆转录病毒包装/逆转录病毒载体/Retrovirus
地区: 上海
规格: TU/ml

逆转录病毒包装/逆转录病毒载体/Retrovirus

 

逆转录病毒介绍:

逆转录病毒(Retrovirus)是一种RNA病毒,在复制时需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA,再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增。它的基因组有三个基因:gag-编码病毒的核心蛋白;pol-编码逆转录酶;env-编码病毒的被膜糖蛋白。

逆转录病毒的DNA基因组整合在宿主染色体上的位点是随机的。逆转录病毒DNA的整合是复制病毒RNA的必经阶段。只有当受感染细胞处于细胞分裂期间,逆转录病毒DNA基因组才能接触到宿主细胞的遗传物质。因此,逆转录病毒只能在分裂中的细胞内复制(图1)。和元上海包装高滴度逆转录病毒,供不同实验需求。

逆转录病毒作用机制

图1 逆转录病毒作用机制

逆转录病毒用于分裂细胞特异性感染,表达稳定高效。逆转录病毒的亲嗜性存在物种之间的差异,据此可将其分为三类:
    (1)单嗜性逆转录病毒(ectropic retrovirus),只感染小鼠和少数几个品种的大鼠;
    (2)兼嗜性逆转录病毒(amphotropic retrovius),能感染小鼠的细胞,也能感染其他种属动物的细胞;
    (3)异嗜性逆转录病毒(xenotropic retrovirus),能感染多种动物细胞,但不能感染小鼠细胞。

 

目前使用较多的是兼嗜性逆转录病毒,即以兼嗜性包装细胞包装病毒颗粒。逆转录病毒的宿主范围由病毒颗粒表面的包被蛋白(Env)决定,病毒基因组不影响其靶向性,不同的基因组可用相同的Env包被,且Env来自何种病毒,包装出的病毒颗粒就叫该病毒的假病毒。

和元上海逆转录病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过qPCR对病毒滴度进行测定。一般情况下我们的逆转录病毒滴度在107~108TU/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

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逆转录病毒 (Retrovirus) 是一类RNA 病毒。在逆转录酶的作用下,以病毒RNA为模板合成cDNA, 再通过DNA复制、转录、翻译等过程形成病毒颗粒,具有基因组结构简单,便于基因操作、转染效率高、宿主范围广、易于分离等优点。 逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,在外源基因表达、基因沉默、基因治疗、生物制药等领域中得到广泛的应用,是分子生物学研究的重要工具。逆转录病毒载体的转染范围广,可以将外源基因整合到基因组上,对细胞的感染效率高。 安必奇凭借多年的病毒包装经验,一直致力于研究和优化逆转录病毒包装技术。我们的逆转录病毒包装技术是一种高效的介导外源基因在细胞内稳定表达的方法,可以在各种哺乳细胞中进行,包括各种难转染的细胞,如神经元细胞、原代细胞、干细胞、肿瘤细胞等,并且针对这类细胞的转染效率接近100%。逆转录病毒表达系统优势 逆转录病毒感染效率高达100 %。 感染范围广,可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等。 转入的外源基因可完全整合到宿主基因组上。 感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。技术流程服务内容 重组载体构建- 将目的基因克隆到逆转录病毒表达载体上(常用的逆转录病毒表达载体有:pBABE-puro-EGFP、pBABE-puro、pBABE-Neo、pWPXL等)。客户可以根据需要自定义选择。 转染- 将载体质粒、辅助质粒、包装质粒共转染进293细胞。 获得病毒颗粒- 逆转录病毒包装、扩增、滴度的测定。 细胞系构建- 建立长期持续表达外源基因的稳定细胞系。交付结果 含目的片段的逆转录病毒一份,可直接用于转染; 引物序列、载体图谱、测序结果各一份; 逆转录病毒包装实验所需试剂耗材、仪器设备、操作过程一份。我们的优势 转染范围广- 可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞、肝细胞等。 感染率高- 对细胞的感染效率可以达到100%。 稳定可靠- 感染细胞不产生病变,可建立长期持续表达外源基因的稳定细胞系。 生物安全性- 先进的设施、健全的BSL-2 实验室及NIH生物安全二级标准保证了我们病毒包装服务的质量和安全。
逆转录病毒 (Retrovirus) 是一类已知的RNA 病毒。需在逆转录酶的作用下首先将RNA 转变为cDNA,再在DNA 复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。该载体系统有两部分组成,一是带有外源基因的重组反转录病毒载体分子,二是能以反式提供病毒结构蛋白的包装细胞,其要求是能高效产生感染靶细胞的重组病毒颗粒,且无野生型的反转录病毒存在,后者是基因治疗安全性的关键问题。逆转录病毒的优势:1. 转染范围广,可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等;2. 转入的外源基因可完全整合;3.对细胞感染率高,几乎达到100 %;逆转录病毒包装216549
安必奇凭借多年的病毒包装经验,一直致力于研究和优化逆转录病毒包装技术。我们的逆转录病毒包装技术是一种高效的介导外源基因在细胞内稳定表达的方法,可以在各种哺乳细胞中进行,包括各种难转染的细胞,如神经元细胞、原代细胞、干细胞、肿瘤细胞等,并且针对这类细胞的转染效率接近100%。逆转录病毒表达系统优势 逆转录病毒感染效率高达100 %。 感染范围广,可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等。 转入的外源基因可完全整合到宿主基因组上。 感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。技术流程服务内容 重组载体构建- 将目的基因克隆到逆转录病毒表达载体上(常用的逆转录病毒表达载体有:pBABE-puro-EGFP、pBABE-puro、pBABE-Neo、pWPXL等)。客户可以根据需要自定义选择。 转染- 将载体质粒、辅助质粒、包装质粒共转染进293细胞。 获得病毒颗粒- 逆转录病毒包装、扩增、滴度的测定。 细胞系构建- 建立长期持续表达外源基因的稳定细胞系。
逆转录病毒载体背景介绍:几乎所有的病毒均可以合适地被改造成为载体。而以逆转录病毒为出发点改造出来的就是逆转录病毒载体。经典的重组逆转录病毒载体包装体系通常包括以下两部分:1、 逆转录病毒载体质粒如pLXSN。 该类质粒通常提供了逆转录病毒包装所需要的所有顺式作用元件,具体包括:1)两个长末端重复序列(LTR):含有整合和调节转录的必需序列;含有转录增强子和启动子;2)tRNA 引物结合位点p;3)包装信号序列ψ。2、包装细胞系如PA317。该包装细胞整合了逆转录病毒包装所需要的所有必需基因(gag,pol,env)。逆转录病毒载体的构建和制备的具体过程是:将目的基因片段(如增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因)构建插入到逆转录病毒载体质粒pLXSN的多克隆位点,获得含目的基因片段的重组逆转录病 毒载体质粒(如pLXSN-EGFP);然后,将含目的基因片段的重组逆转录病毒载体质粒(如pLXSN-EGFP)转染包装细胞PA317,经过选择培 养获得产病毒细胞系(VPC);细胞不裂解,病毒不断分泌至培养上清中,由培养上清中就可以收获得到具有感染能力的含目的基因片段的重组逆转录病毒颗粒 (如含EGFP的重组逆转录病毒颗粒)。重组逆转录病毒载体能有效感染非分裂细胞和分裂细胞,将载体中所携带的目的基因整合到宿主细胞基因组中,使之随细胞基因组的分裂而分裂,目的基因能 实现长期稳定的表达。大量文献研究表明,逆转录病毒载体能够感染那些其它载体难以转染的细胞,如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞,它能介导所包含的目的 基因在脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等组织或细胞中长期表达。因此,人们常用逆转录病毒载体将目的基因(或RNAi) 导入动物或者人原代细胞或细胞系。服务内容:公司为实验室研究者提供可用于细胞和动物实验的研究级的逆转录病毒载体的构建和制备服务,客户在质粒构建完成的情况下,公司能在30个工作日内提供所包装逆转录病毒载体,最快可20个工作日内交货。如果客户需要公司帮助将目的基因构建到载体穿梭质粒中,则需要70-90个工作日。合同可提供的逆转录病毒载体的总量通常为: 1E6~1E7 CFU;所提供的逆转录病毒载体的滴度通常为:1E4~1E6 CFU/ml。客户需要提供物品的内容和信息:1、质粒图谱;2fiveplus mmirv-001

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