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逆转录病毒包装/逆转录病毒载体/Retrovirus
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OBiO和元生物
- 规格:
TU/mL
逆转录病毒介绍:
逆转录病毒(Retrovirus)是一种RNA病毒,在复制时需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA,再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增。它的基因组有三个基因:gag-编码病毒的核心蛋白;pol-编码逆转录酶;env-编码病毒的被膜糖蛋白。
逆转录病毒的DNA基因组整合在宿主染色体上的位点是随机的。逆转录病毒DNA的整合是复制病毒RNA的必经阶段。只有当受感染细胞处于细胞分裂期间,逆转录病毒DNA基因组才能接触到宿主细胞的遗传物质。因此,逆转录病毒只能在分裂中的细胞内复制(图1)。和元上海包装高滴度逆转录病毒,供不同实验需求。
图1 逆转录病毒作用机制
逆转录病毒用于分裂细胞特异性感染,表达稳定高效。逆转录病毒的亲嗜性存在物种之间的差异,据此可将其分为三类:
(1)单嗜性逆转录病毒(ectropic retrovirus),只感染小鼠和少数几个品种的大鼠;
(2)兼嗜性逆转录病毒(amphotropic retrovius),能感染小鼠的细胞,也能感染其他种属动物的细胞;
(3)异嗜性逆转录病毒(xenotropic retrovirus),能感染多种动物细胞,但不能感染小鼠细胞。
目前使用较多的是兼嗜性逆转录病毒,即以兼嗜性包装细胞包装病毒颗粒。逆转录病毒的宿主范围由病毒颗粒表面的包被蛋白(Env)决定,病毒基因组不影响其靶向性,不同的基因组可用相同的Env包被,且Env来自何种病毒,包装出的病毒颗粒就叫该病毒的假病毒。
和元生物逆转录病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过qPCR对病毒滴度进行测定。一般情况下我们的逆转录病毒滴度在107~108TU/mL,完全可以满足各类实验的使用要求。
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的不同连接子序列,并识别出几个新的 gag-ABE8e 连接子。发现与 v1 BE-eVLPs 相比,它们均提高了编辑效率。其中,v2.4 BE-eVLPs 在所有剂量下的编辑效率都比其他高 1.2 到 1.5 倍。因此,提高优化连接肽裂解动力学,可以提高 eVLP 的活性。 图片来源:Cell 随后,在 v2.4 BE-eVLPs 的基础上,通过添加出核信号(Nuclear Export Signals, NESs)增强了其入核能力和碱基编辑效率,并提高了逆转录病毒颗粒的包装效果,最终经过筛
表达系统 腺病毒表达系统 逆转录病毒表达系统 病毒DNA游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 病毒DNA整和于宿主基因组内,长时间、稳定表达外源基因 感染分裂和不分裂细胞 只感染有丝分裂细胞 高水平表达 中水平表达 双载体 单载体 病毒滴度高达1012pfu/ml 病毒滴度最高可达106pfu/ml 可插入高达8kb的外源片段 可插入不超过6.5kb的外源片段 会引起体内免疫反应 不会引起体内免疫反应 构建重组腺病毒简单快捷 构建重组腺病毒的两种传统方法是以同源重组为基础的。其一是用修饰
(by Mizuguchi和Kay),CLONTECH的Adeno-X™表达系统提供了一种快速、高效构建重组腺病毒的方法。只需4至7天就可以获得重组腺病毒。由于经过7天的培养之后HEK 293细胞会渐渐失去对培养皿的附着而扩散,导致噬斑融合,用传统方法制备重组腺病毒往往需要铺平板以防止细胞扩散。而用CLONTECH的Adeno-X™表达系统只需4至7天即可得到纯的重组腺病毒,这意味着无需铺琼脂糖平板。Adeno-X表达系统含有一种小而便捷的穿梭载体―pShuttle,用于克隆目的基因。这种载体的表达框两侧含有极稀少
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