小鼠白细胞介素4Mouse IL-4 ELISA KIT(4

小鼠白细胞介素4Mouse IL-4 ELISA KIT(48T/96T)
IL-4简介：
白介素4(IL-4)是一种多功能细胞因子，主要是由激活的T淋巴细胞、肥大细胞与骨髓基质细胞表达。IL-4因为糖基化的不同，分子量从15到19kDa不等。
IL-4可以对多种细胞起到调节免疫反应功能的作用。白细胞介素4参与多种B-细胞等此类细胞的激活过程，是DNA合成的协同刺激分子，它能诱导静息B细胞上II 型MHC (主要组织相容复合体)分子的表达。能增强IgE与 IgG1的分泌以及在细胞表面的表达，还可以调节淋巴细胞和单核细胞上对IgE低亲和Fc受体的表达。IL-4在抗体亚型转换中也起到重要的调节作用，是T辅助前体细胞向Th2细胞分化的重要调节因子，从而间接调节体液免疫以及抗体的生成。此外，白细胞介素4基因在机体中的的遗传变异可导致缺血性中风易感性提高，脑血管意外或脑梗塞等疾病。

小鼠白细胞介素4Mouse IL-4 ELISA KIT(48T/96T)
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-4的浓度。小鼠IL-4捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IL-4会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-4抗体后，抗小鼠IL-4抗体与小鼠IL-4接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-4将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，小鼠IL-4浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-4浓度。
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头；  
2.酶标仪；
3.自动洗板机；                    
4.去离子水或双蒸水；

小鼠白细胞介素4Mouse IL-4 ELISA KIT(48T/96T)
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于 4℃ 。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温(25～ 28℃ )孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。     
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温(25～ 28℃ )孵育60分钟。   
6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温(25～ 28℃ )孵育20分钟。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温(25～ 28℃ )孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD₄₅₀值。

结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
 

浓度pg/ml	典型OD值1	典型OD值2	OD平均值
0	0.0827	0.0954	0.0890
31.25	0.189	0.185	0.187
62.5	0.2883	0.287	0.2876
125	0.4593	0.4401	0.4497
250	0.8235	0.7943	0.8089
500	1.3691	1.3094	1.3392
1000	1.9993	1.9098	1.9545