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- HAKATA
- XSEJ-02(96t)
- 2025年08月22日
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- 文献和实验
- 技术资料
IL-2简介：
IL-2是一种主要由T淋巴细胞产生的多效性的细胞因子，成熟的鼠IL-2是149个氨基酸的糖蛋白，由169个氨基酸的前体蛋白通过剪切而成为成熟的蛋白。
IL-2 在抗体刺激引起的不同反应阶段的T细胞，自然杀伤细胞和B细胞的细胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2还可调节γ干扰素、主要组织相容性抗原的表达，刺激活化的B细胞的增殖和分化，提高自然杀伤细胞的活性和抑制粒细胞/巨噬细胞的的增殖。IL-2还可诱导少胶突细胞的增殖和分化。
小鼠白细胞介素2Mouse IL-2 ELISA KIT(96T)
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-2的浓度。小鼠IL-2捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠IL-2会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-2抗体后，抗小鼠IL-2抗体与小鼠IL-2接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-2将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，小鼠IL-2浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-2浓度。
小鼠白细胞介素2Mouse IL-2 ELISA KIT(96T)
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头；
2.酶标仪；
3.自动洗板机；
4.去离子水或双蒸水；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温(25～
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温(25～
6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温(25～
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温(25～
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
| 浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
| 0 | 0.1099 | 0.1036 | 0.10675 |
| 31.25 | 0.17 | 0.2098 | 0.1899 |
| 62.5 | 0.2563 | 0.2846 | 0.27045 |
| 125 | 0.4362 | 0.4059 | 0.42105 |
| 250 | 0.7677 | 0.8169 | 0.7923 |
| 500 | 1.2286 | 1.1885 | 1.20855 |
| 1000 | 2.0198 | 1.9421 | 1.98095 |
注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度，特异性和重复性:
1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为7.7pg/ml。
2.特异性：与鼠C10、G-CSF、GM-CSF、IFN-、IL-1、IL-3、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、JE、KC、LIF、M-CSF、MIP-1、MIP-2SCF、TNF、Tpo、VEGF和人IL-2、 IL-2 \Sr等没有交叉反应。
3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.
参考文献:
Kuziel and Greene, 1990 J. Invest. Dermatol., 94:275
Parkinson et al., 1988 J. Immunol. Methods, 15:105
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