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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1mL×10
(1) Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞0.1mL×10规格实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
以下是Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞0.1mL×10规格的详细介绍点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
储存事项:
A. Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞0.1mL×10规格在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞0.1mL×10规格组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
Indo-1，五铵盐1mg dITP 溶液，100mM0.5mL
JC-11mg DiOC6(3) 碘化物100mg
JC-105mg DiO( 细胞膜绿色荧光探针 )10mg
Lucigenin( 光泽精 )10mg DiIC12(3) 高氯酸化物100mg
Lyso-Tracker Red( 溶酶体红色荧光探针 )50μL DiIC1(5) 碘化物100mg
Southern 级细菌 (G-)DNAout10 次 小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL
Southern 级细菌 (G+)DNAout10 次 小鼠抗 His 标签单抗100μL
一步式细菌 DNAout50 次 小鼠抗 His 标签单抗1000μL
分枝杆菌 DNAout50 次 小鼠抗 Flag 标签单抗100μL
柱式分枝杆菌 DNAout50 次 小牛胸腺 DNA 溶液1mL
小 RNA 克隆试剂盒10 次 Tricine-SDS-PAGE 阳极电泳液 ( 干粉 )10L
通用 miRNA 克隆接头0.83nmol Tricine-SDS-PAGE 上样液5mL
克必隆常态转化液20 次 Tricine-SDS-PAGE 上样液1mL
菌落 PCR 试剂盒 2.050 次 Tricine-SDS-PAGE 配胶液250mL
IPTG 干粉2.5g Tricine-SDS-PAGE 配胶液1000mL
白色噬琼胶菌 鲁氏酵母
大秃马勃 硫乙醇酸盐流体培养基100ml
化脓性链球菌 肉葡萄球菌
宋内志贺菌CMCC51592冻干粉 迟缓芽孢杆菌
近平滑假丝酵母 异常汉逊酵母变种
丁香假单胞菌 铜绿假单胞菌冻干粉
侵蚀侏儒囊菌 藤黄微球菌
皮状丝孢酵母 朝鲜芽孢八叠球菌
亮白曲霉 胶质芽孢杆菌
真线侧耳短孢变种 根霉属的种
Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞0.1mL×10规格哈氏弧菌 改良马丁琼脂培养基200ml
冰核细菌 意大利青霉
荨麻青霉 苏云金芽胞杆菌云南亚种 Bacillus thuringiensis subsp. yunnanensis
栖土曲霉 构巢曲霉
类红红细菌 淡紫灰链霉菌
服务流程：
1）Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞0.1mL×10规格客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
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文献和实验-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
由它们的天然启动子驱动。在 Rosetta （ DE3 ） pLysS 和 Rosetta （ DE3 ） pLacI 中，稀有 tRNA 基因存在于分别带有 T7 溶菌酶和 lac 阻遏基因的同一质粒上。 Tuner 菌株为 BL21 的 lacZY 缺失突变株，能够调整培养物中所有细胞的蛋白表达水平。 lac 通透酶（ lacY ）突变使得 IPTG 均匀进入群体所有细胞，从而具有浓度依赖、水平均一的诱导表达。通过调整 IPTG 浓度，表达可从极低水平调节到极强、完全诱导的表达水平（通常
本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
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