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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
海量 PCR 片段纯化试剂盒
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海邦景
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
5次

服务流程:
1)海量 PCR 片段纯化试剂盒5次说明书客户提供材料
2)提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供:
新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细菌等)
4℃保存一周,-20℃保存一个月,-80℃保存一年血液样品(EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
详细的背景资料:来源、特点、类型等
我们提供:基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证:高纯度RNA/DNA、完整货期:3-5个工作日
储存事项:
A. 海量 PCR 片段纯化试剂盒5次说明书在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打,颠倒混匀,充分溶解RNase A和DNase I后,按照每次使用量分装-20℃冻存,有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项:
1. 海量 PCR 片段纯化试剂盒5次说明书组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存,因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复苏到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
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丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗体 Anti-MARCKS WB IHC-P IHC-F IF 100ul
实验步骤:
(1) 海量 PCR 片段纯化试剂盒5次说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验过的 DNA 聚合酶增强了与模板的亲和度,其灵敏度更高,因而所需的模板量少。过低的模板量会减少 PCR 的产量,过高的模板量可能造成非特异性扩增,所以 DNA 模板量的优化尤为重要。 除了 gDNA、cDNA 和质粒 DNA,PCR 产物也可作为模板以获得更高的产量。但 PCR 产物中存在的残余反应组分(如引物、dNTP、盐和副产物)可能会影响下一次的 PCR 反应。所以推荐在下一次 PCR 前使用 PCR 产物纯化试剂盒将 PCR 产物先进行纯化。 【DNA 聚合酶】 DNA 聚合酶是PCR扩增中最关键
一、实验原理 聚合酶链式反应(PCR)是模拟体内DNA复制条件在体外酶促合成特异DNA片段的循环反应,可使目的DNA片段得以迅速扩增。其主要步骤是:将待扩增的模板DNA置于高温(约93℃~95℃)下使之变性解链;人工合成的两个寡核苷酸引物在低温(约50℃~70℃)下分别与目的DNA片段两侧的互补序列复性结合;引物在DNA聚合酶作用(约70℃~75℃)下沿模板按5’→3’方向延伸,合成目的DNA片段的新互补链。如此经过n个周期,理论上扩增2n倍,一般PCR经30~40周期后可获得百万
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我们将如何应对海量的基因信息 新一代测序技术带给人们大量遗传信息的同时,却成为限制其广泛应用的一个障碍。 1980年,英国生物化学家Frederick Sanger与美国生物化学家Walter Gilbert建立了DNA测序技术并获得诺贝尔化学奖,至今已有近三十年了。在这三十年,DNA测序技术取得了令人瞩目的进展。目前已进入市场的循环阵列测序平台采用的是与Sanger生物化学测序方法完全不同的原理。在过去几年,应用极为广泛的毛细管电泳测序法采用的则是多线并行阵列格式,它运用尖端的荧
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