Gel & PCR Cleanup Kit 胶回收及PCR产

产品描述：

      本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以同时用于胶回收和PCR产物纯化回收，该试剂盒包含两套回收方案，如需从多个条带中回收某一特定条带，可采用胶回收步骤，需将目的DNA片段从琼脂糖凝胶上切下，溶胶后再回收DNA片段。如只需从PCR产物或酶促反应液中回收纯化DNA片段，可采用PCR Cleanup回收步骤。一个试剂盒满足多种需求，简单方便。

 

产品组分：

 

试剂盒组分	保存	100T	200T
Buffer QC	室温	60mL	120mL
Buffer QG	室温	200mL	400mL
Buffer PE	室温	40mL 使用前请添加160mL无水乙醇	80mL 使用前请添加320mL无水乙醇
Buffer EB	室温	30mL	60mL
离心柱和收集管	室温	100套	200套

 

产品特点：

 

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

3.Buffer QG加酚红调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。

4.改进的溶胶液Buffer QG和Buffer QC配方，大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。

5.快速、方便，不需要使用有毒的ben酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

 

运输和保存方法：

 

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

 

注意事项：

 

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.溶胶液Buffer QG和Buffer QC中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

3.回收纯化的DNA片段一般在70bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。

4.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达80％。

5.切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。

6.Buffer EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

7.本产品仅作科研用途！

 

 

使用方法：

 

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer PE中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

 

一、胶回收操作步骤

 

1、在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。

2、将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心管，称重。

（先称一个空1.5ml离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。）

3、加3倍体积溶胶液Buffer QG。

例如凝胶重为100mg，其体积可视为100μL，则加入300μL溶胶液Buffer QG。

如果凝胶浓度大于2％，应加入6倍体积溶胶液Buffer QG。

4、56℃水浴放置10分钟（或直至胶完全溶解）。每2-3分钟涡旋震荡一次帮助加速溶解。

5、将上一步所得溶液加入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

6、加入750μL的Buffer PE（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

7、加入750μL的Buffer PE，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

8、将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去残留的溶液，以免残留乙醇抑制下游反应。

9、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液Buffer EB（Buffer EB事先在 65-70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1分钟。

▲注意：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于25μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。

 

二、PCR产物纯化回收操作步骤

 

1、按照5:1（结合液Buffer QC：样品）的比例，将结合液Buffer QC加入到PCR扩增产物或者酶切产物中，充分混匀。（例如50μL的PCR扩增产物或者酶切后产物加入250μL结合

液 Buffer QC，充分混匀）。

2、将上一步所得溶液加入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室温放置1 min，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

3、加入600μL的Buffer PE（请先检查是否已加入无水乙醇!）到离心柱中，12,000 rpm 离心30 sec，弃滤液。

4、再加入600μL的Buffer PE重复一遍，12,000 rpm 离心30 sec，弃滤液。

5、将吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 离心2 min，尽量除去漂洗液Buffer PE，以免残留的乙醇抑制下游反应。

6、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50µL洗脱缓冲液Buffer EB（Buffer EB事先在 80°C-90°C 水浴中预热可提高产量），室温放置 2 min，12,000 rpm离心 1 min，弃吸附柱，纯化产物即在离心管中。

▲注意1：为了增加DNA的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入到吸附柱中，室温放置1min后，12,000 rpm离心1 min，洗脱两遍可以提高大约10%的浓度。

▲注意2：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于25μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。

 

产品仅用于科研等非医疗用途！