Bradford蛋白定量试剂盒

特别提示：包括Bradford蛋白定量试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Bradford蛋白定量试剂盒
英文名称：Ultra Bradford Protein Assay Kit
产品货号：WE0275
产品规格：800次微孔板(100管次)

  Bradford 法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。 这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595 nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595 nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良，最大限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为100-1,500μg/ml。使用本产品反应迅速，颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统，不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。

试剂盒组成：

组成	规格
Bradford Protein Assay Reagent	2×100ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

注意事项：
1、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
2、本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量，具体干扰物质(具体见附表1)，可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
3、所测蛋白分子量必须大于3 kD。

使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
 

管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品最终浓度(μg/ml)
A	0	100	2000
B	50	150	1500
C	200	200	1000
D	200	200(从C管中取)	500
E	200	200(从D管中取)	250
F	200	200(从E管中取)	125
G	200	0	0(空白)

2、试管检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)按上表稀释标准品，将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
2)取干净的试管，分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个测定做2-3个平行反应。
3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，室温放置10分钟。
4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。
5)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

3、微孔检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10分钟。
3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

附表1. 干扰物质表

化合物	耐受浓度
缓冲液
乙酸盐	0.6M
甘氨酸	0.1M
HEPES	0.1M
MES	0.7M
MOPS	0.2M
Na+-柠檬酸	50mM
PIPES	500mM
磷酸钠/磷酸钠	1M
乙酸钠	0.6M
Tris	2M
盐类
硫酸铵	1M
NaCl	1M
尿素	6M
极性化合物
甘油	99%
还原剂
β-巯基乙醇	1M
DTT	1M
去垢剂和变性剂
Brij35	干扰
脱氧胆酸纳	0.25%
CHAPS	1%
NP-40	干扰
辛葡糖	2%
SDS	0.1%
Tween-20	干扰
Triton X-100	0.1%
糖类
蔗糖	1mM
螯合剂
EDTA	100mM
EGTA	50mM
其他
HCl	0.1M
NaOH	0.1M
NAD	1mM
苯	5%

储存条件：2～8℃

除了Bradford蛋白定量试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：TBS(pH8.0,10×)
货号：WE0313
规格：500ml

名称：TBS缓冲液(20×)
货号：SNM396
规格：500ml

名称：DAB显色试剂盒(20×)
货号：SNM427
规格：60ml|20ml

名称：10×Tris-Tricine-SDS缓冲液(干粉)
货号：RFT061
规格：500ml
本品开封后将全部干粉溶于500ml蒸馏水中即配成10×TrisTricine-SDS缓冲液，电泳时稀释成1×缓冲液即用液，不要调节pH。用于超低多肽电泳使用。

名称：10×WB洗涤液(PBS)
货号：KFS068
规格：100ml
WB洗涤液可以用于Western Blot时一抗或二抗孵育后的洗涤。适当的洗涤可降低背景，增强信噪比。

使用说明
1. 取适量10×WB 洗涤液，用去离子水10 倍稀释。在一抗或二抗孵育结束后，加入适量的WB 洗涤液，使之能盖住杂交膜，在摇床上缓慢摇动洗涤10-15 分钟后，吸尽洗涤液，再加入新的WB 洗涤液。共洗涤3 次，每次10-15 分钟。然后进行后续的操作。
2. 如果按照上述洗涤条件,WB 的染色结果背景仍然较高，可以适当延长洗涤时间，并增加洗涤次数。通常，延长洗涤时间或增加洗涤次数不会对WB 的结果产生负面影响。

注意事项
1. WB洗涤液经过滤除菌处理，使用过程中应尽量避免细菌污染。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存：RT，有效期12个月。



名称：RIPA裂解液(弱)
货号：SY0315
规格：100ml
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

本品为较为温和的裂解液（即RIPA裂解液（弱）），含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。

注意事项

1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

使用说明：

(一) 细胞样品

1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：

1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。