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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
Tissue Protein Extraction Kit
- 库存:
370
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京组织蛋白抽提试剂盒哪里卖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多组织蛋白抽提试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。
名称:北京组织蛋白抽提试剂盒哪里卖
英文名:Tissue Protein Extraction Kit
产地:国产|进口
规格:25次|100次
本试剂盒应用于组织样本的总蛋白提取。提取蛋白之前可根据具体实验需要加入蛋白酶抑制剂、盐、还原剂、螯合剂等成分。使用该提取液提取的组织蛋白,可进行蛋白活性分析、免疫检测、蛋白纯化等下游操作,并可采用BCA、Bradford、Lowry法进行蛋白定量。试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物,可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。
试剂盒组成:
| 组份 | 25次 | 100次 |
| Tissue Protein Extraction Reagent | 25ml | 100ml |
| Protease Inhibitor Cocktail | 250μl | 1ml |
保存条件:Protease Inhibitor Cocktail:-20℃,其它组分:室温
注意事项:
1、本产品适用于提取心肌、骨骼肌、肾脏、前列腺、皮肤、结肠、肝脏等软组织。
2、为防止蛋白降解,所有的操作尽量在冰上进行。
3、使用本产品提取蛋白后,可采用BCA、Bradford、Lowry法进行蛋白定量。
4、为了获得实验最佳效果,请根据实验调整最佳使用量。
使用方法:
1、请在实验前取出Tissue Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、取适量Tissue Protein Extraction Reagent,抽提蛋白2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail,即1×工作液。
3、1 g组织加入10ml 1×工作液匀浆处理(抽提试剂的使用量可根据组织不同而调整)。若需要浓缩的蛋白提取物,可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
4、冰上孵育20分钟(冰上放置时间可根据组织不同而调整)。
5、10000×g 离心15-20分钟。
6、转移上清至新管中,进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。
储存条件:-20℃
更多有关北京组织蛋白抽提试剂盒哪里卖的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·Protein A琼脂糖凝胶
编号:WE0271
英文名称:Protein A-Agarose
规格:5ml
本产品可从血清,腹水,细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体 Fc片段的基因工程重组蛋白。具有高IgG结合特异性,高流速,低Protein A-Agarose脱落等特点。
注意事项:
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱,避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1,长径比过大将导致洗脱峰拖尾,洗脱体积增大;长径比过小将导致样品与填料接触时间短,吸附不充分,填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高,应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml,抗体浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短,洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性,以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后,应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理,长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。
使用方法:
I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液:纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的,部分参照如下。
| 抗体 | 平衡缓冲液成分 |
| 人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b | 20 mM PBS,300 mM NaCl,pH7.4-8.5 |
| 人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3 | 50 mM Tris-Cl,3 M NaCl,pH7.8-8.5 |
2、洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸*缓冲液,pH4.0。
3、再生缓冲液:1 M NaCl。
4、中和缓冲液:1 M Tris-Cl,pH9.0。
注意:
1)以上缓冲液使用前均需0.45μM滤膜过滤。
2)为提高抗体和介质的吸附力。可适当提高平衡缓冲液中的盐浓度和ph值。
II 样本制备
1、样品用平衡缓冲液稀释5-10倍。
2、细胞培养液中大量的血清蛋白会对亲和层析造成一定的干扰,去血清处理或稀释样品将提高纯化抗体收率。
注意:样品在上柱前需0.45μM微孔滤膜过滤。
III 操作步骤
1、将Protein A-Agarose填料混匀后加入层析柱,室温静置10分钟,待凝胶与溶液分层后,把底部的出液口打开,让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2、向装填后的柱中加入3-5个柱床体积的超纯水将乙醇冲洗干净,用平衡缓冲液流洗5-10个柱床体积平衡柱子。
3、将样品上柱,上样流速60 cm/h。
4、平衡缓冲液再洗5-10个柱床体积,直至基线平稳。
5、洗脱缓冲液洗脱,收集洗脱峰,用中和缓冲液将洗脱收集样品中和到中性。
6、立即用5-10个柱床体积平衡缓冲液平衡柱子到中性。
7、再生缓冲液流洗3-5个柱床体积。先后用纯水、20%乙醇分别流洗3-5个柱床体积。柱子置于2~8℃保存。
注意:收集洗脱峰时可以分阶段收集到多个管中,最后根据测定结果重新调整收集方式。
8、本产品使用10次以上后先用20%乙醇洗5个柱床体积,再用70%乙醇洗脱5-10个柱床体积,再用20%乙醇流洗3-5个柱床体积。柱子置于2~8℃保存。
储存条件:2~8℃,避免冷冻
北京组织蛋白抽提试剂盒哪里卖关键词:组织蛋白抽提试剂盒,Tissue Protein Extraction Kit,WE0260
·血液RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号:WE0197
英文名称:RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
规格:50次
本试剂盒适用于从新鲜全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)中提取总RNA,可处理多至1.5ml的全血,洗脱得到分子量大于200 bp的高纯度RNA,多个样品可以在1小时内同时完成。本产品无需CsCl纯化的超离心步骤和LiCl或乙醇沉淀,不含有*酚或*仿等有毒溶剂,经过纯化的RNA有效去除血红素、肝素等酶抑制剂和污染物,可直接用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| DNase I | 1000 U |
| 10×Reaction Buffer | 1000μl |
| Buffer RBL(10×) | 60ml |
| Buffer RL | 35ml |
| Buffer RW1 | 40ml |
| Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
| RNase-Free Water | 10ml |
| 过滤柱FL及收集管 | 50套 |
| 吸附柱RM及收集管 | 50套 |
| RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融,否则影响提取RNA提取得率和质量。样品在Buffer RL中,可于-70℃保存一个月。
3、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀,可置于于56℃水浴重新溶解。
6、本试剂盒不能用于加入抗凝剂的冷冻血液样本RNA的提取。
7、10×Buffer RBL需在使用前将溶液用无RNase的水进行10倍稀释,稀释后置于2~8℃保存。
操作步骤:
1、向新鲜的抗凝全血样本中,加入5倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍),轻轻涡旋或颠倒混匀。冰上孵育10-15分钟,孵育过程中混匀两次。
注意:孵育过程中浑浊的悬液会变成透明,证明红细胞被裂解,必要时可以把孵育时间延长至20分钟。
2、4℃ 2,100 rpm(~400×g)离心10分钟,小心吸弃上清。
3、向以上沉淀中加入2倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍),轻轻涡旋,充分重悬沉淀。
4、4℃ 2,100 rpm离心10分钟,小心并彻底吸弃上清。
注意:此步一定要完全去除上清否则影响裂解导致RNA产量下降。
5、向沉淀中加入Buffer RL(使用前检查是否已经加入β-巯基乙醇),具体加量按照下表进行,涡旋混匀。
注意:如果血液不是健康人的全血,需要根据血液中白细胞的数量来确定所需Buffer RL的加入量。完全混匀后细胞应完全裂解,块状沉淀消失。
| Buffer RL(μl) | 健康人类全血(ml) | 白细胞数量 |
| 350 | 小于0.5 | 多至2×106 |
| 600 | 0.5-1.5 | 2×106 至1×107 |
6、将以上所得液体转移到已装入收集管的过滤柱中,12000rpm(~~13400×g)离心2分钟,收集滤液,弃掉过滤柱。
7、向滤液中加入1倍体积(600μl或350μl)的70%乙醇(无RNase水配制),混匀。
注意:加入乙醇后可能会产生沉淀,不会影响后续实验。
8、将上步所得溶液全部加入到吸附柱中(已装入收集管),若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
10、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
11、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
12、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
16、将吸附柱置于一个新的RNase-Free的1.5ml离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water再次洗脱,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京组织蛋白抽提试剂盒哪里卖关键词:组织蛋白抽提试剂盒,Tissue Protein Extraction Kit,WE0260
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