DNATrans转染试剂

特别提示：包括DNATrans转染试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DNATrans转染试剂
英文名称：DNATrans Transfection Reagent
产品货号：WE0255
产品规格：500μl

  DNATrans是一种高效的阳离子脂质体转染试剂，适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率，并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染，基因表达和基因功能研究。

实验前准备及重要注意事项
1、DNATrans Transfection Reagent使用前应先震荡摇匀。
2、转染效率与细胞密度有很大关系， 不同实验间应保持一个基本的传代步骤，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。一般贴壁细胞转染的最佳细胞密度是80%-90%，悬浮细胞的最佳细胞密度为3-5×105细胞/ml，用于转染的最佳细胞度应根据不同的细胞类型或用途而异。
3、转染时不要在培养基中加入抗生素，否则会导致细胞死亡。

使用方法：
1、对于大部分的细胞系， DNA与DNATrans Transfection Reagent的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性，实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
a. 贴壁细胞：转化前一天，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种0.5-2×105个细胞，待细胞长至80%-90%满时进行转染。
b. 悬浮细胞：在细胞转染之前，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种3-5×105个细胞。
2、转染当天，首先准备转染复合物，对于每孔细胞按照以下用量配制：
a. 取适量DNA，加入25μl无血清培养基，并轻轻的混合均匀。
b. 取适量DNATrans Transfection Reagent，加入25μl无血清培养基，轻轻混匀，并于室温孵育5分钟。
c. 孵育5分钟之后，将稀释的DNA和稀释的DNATrans Transfection Reagent混合(使DNA以及DNATrans Transfection Reagent的终总体积为50μl)，轻轻混合均匀，并在室温下孵育20分钟(溶液可能会出现絮状，但不会影响转染效率)。
注意：该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3、将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450μl无血清培养基，然后将步骤2中50μl转染复合物加入到24孔板内，轻轻前后推动24孔板以混匀。
4、将细胞置于含5% CO2，37℃条件下培养4-6小时后，更换成500μl生长培养基。
5、18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6、对于稳定的细胞系：在转染24小时后，细胞按照1:10的比例传代，第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注意：
1)该说明为一个24孔的用量，若同时转几个孔，配制转染复合物的量需加倍；若转染其他类型孔板，DNA和DNATrans Transfection Reagent用量见附表，该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
2)转染4-6小时后也可以不更换生长培养基，但由于DNATrans Transfection Reagent具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象，建议更换生长培养基。
3)优化条件：想要得到更高的转染效率，应优化转染条件：培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。

附表：293T细胞转染参考数据

培养板	每孔表面积	铺板用培养基体积	DNA和稀释体积	DNATrans Transfection Reagent和稀释体积
96孔	0.3cm2	200μl	0.13μg至10μl	0.5μl至10μl
24孔	2cm2	500μl	0.8μg至25μl	2μl 至25μl
12孔	4cm2	1ml	1.6μg至50μl	4μl至50μl
35 mm	10cm2	2ml	4.0μg至100μl	10μl至100μl
6孔	10cm2	2ml	4.0μg至100μl	10μl至100μl
60 mm	20cm2	5ml	8.0μg至500μl	20μl至500μl
10 cm	60cm2	10ml	24μg至800ml	60μl至800μl

储存条件：2～8℃，避光

除了DNATrans转染试剂,，我公司还供应以下相关产品：



名称：大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞
货号：BTN140576
规格：0.1mL*10
 本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107CFU/μg。
 DH10Bac细胞包含亲本Bacmid bMON14272和辅助质粒 pMON7124。亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。
 辅助质粒包含tns ABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒(pFastBac1，pFastBacDual等)含有Tn7R和Tn7L 同源重组臂，Tn7R和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac的重组质粒转化到DH10Bac细胞后，发生重组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid转染昆虫细胞Sf9或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac细胞中的The φ80dlacZDM15基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组bacmid的蓝白斑筛选。
 菌株基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG/pMON14272/pMON7124。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，避免反复冻融，有效期半年。

自备试剂：重组质粒、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 制备含有如下抗生素的LB 固体平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10μg/mL tetracycline，100μg/mL X-gal，40μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
4. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
5. 每个离心管中加入900μl 无菌的SOC(不含抗生素)，混匀后置于37℃ 摇床，200rpm 振荡培养4小时。
6. 用 SOC培养基进行10倍梯度稀释，如分成3个稀释梯度10-1,10-2,10-3。
7. 取 100μl的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养24-48小时。
8. 保留剩余的菌液保存于4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。