DNATrans转染试剂批发

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北京百奥莱博专业生产供应DNATrans转染试剂批发，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：DNATrans转染试剂批发
规格：500μl
英文名：DNATrans Transfection Reagent
品牌：百奥莱博
编号：WE0255
产地：国产|进口
  DNATrans是一种高效的阳离子脂质体转染试剂，适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率，并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染，基因表达和基因功能研究。

实验前准备及重要注意事项
1、DNATrans Transfection Reagent使用前应先震荡摇匀。
2、转染效率与细胞密度有很大关系， 不同实验间应保持一个基本的传代步骤，确保转染时细胞没有长满或处于静止期。一般贴壁细胞转染的最佳细胞密度是80%-90%，悬浮细胞的最佳细胞密度为3-5×105细胞/ml，用于转染的最佳细胞度应根据不同的细胞类型或用途而异。
3、转染时不要在培养基中加入抗生素，否则会导致细胞死亡。

使用方法：
1、对于大部分的细胞系， DNA与DNATrans Transfection Reagent的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性，实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
a. 贴壁细胞：转化前一天，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种0.5-2×105个细胞，待细胞长至80%-90%满时进行转染。
b. 悬浮细胞：在细胞转染之前，在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基，并于每孔中接种3-5×105个细胞。
2、转染当天，首先准备转染复合物，对于每孔细胞按照以下用量配制：
a. 取适量DNA，加入25μl无血清培养基，并轻轻的混合均匀。
b. 取适量DNATrans Transfection Reagent，加入25μl无血清培养基，轻轻混匀，并于室温孵育5分钟。
c. 孵育5分钟之后，将稀释的DNA和稀释的DNATrans Transfection Reagent混合(使DNA以及DNATrans Transfection Reagent的终总体积为50μl)，轻轻混合均匀，并在室温下孵育20分钟(溶液可能会出现絮状，但不会影响转染效率)。
注意：该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3、将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450μl无血清培养基，然后将步骤2中50μl转染复合物加入到24孔板内，轻轻前后推动24孔板以混匀。
4、将细胞置于含5% CO2，37℃条件下培养4-6小时后，更换成500μl生长培养基。
5、18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6、对于稳定的细胞系：在转染24小时后，细胞按照1:10的比例传代，第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注意：
1)该说明为一个24孔的用量，若同时转几个孔，配制转染复合物的量需加倍；若转染其他类型孔板，DNA和DNATrans Transfection Reagent用量见附表，该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
2)转染4-6小时后也可以不更换生长培养基，但由于DNATrans Transfection Reagent具有一定的细胞毒性，作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象，建议更换生长培养基。
3)优化条件：想要得到更高的转染效率，应优化转染条件：培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。

附表：293T细胞转染参考数据

 

培养板	每孔表面积	铺板用培养基体积	DNA和稀释体积	DNATrans Transfection Reagent和稀释体积
96孔	0.3cm2	200μl	0.13μg至10μl	0.5μl至10μl
24孔	2cm2	500μl	0.8μg至25μl	2μl 至25μl
12孔	4cm2	1ml	1.6μg至50μl	4μl至50μl
35 mm	10cm2	2ml	4.0μg至100μl	10μl至100μl
6孔	10cm2	2ml	4.0μg至100μl	10μl至100μl
60 mm	20cm2	5ml	8.0μg至500μl	20μl至500μl
10 cm	60cm2	10ml	24μg至800ml	60μl至800μl

储存条件：2～8℃，避光

DNATrans转染试剂批发正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)
编号：WE0237
英文名称：T4 Polynucleotide Kinase
规格：500U|2500U
  T4多聚核苷酸激酶，是由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体，可以催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷间进行转移和交换，同时还具有3’磷酸酶活性，能将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。该T4多聚核苷酸激酶可用于寡核苷酸、DNA或RNA的5’末端标记或磷酸化；催化3’磷酸化的单核苷酸5’磷酸化以及去除3’端磷酸基团等。本品于75℃加热10分钟可使其失活，加入EDTA也可使其失活，金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50 mM的KCl和NaCl均可显著抑制其活性。

·X光暗盒(12.7cm×17.8cm)
编号：WE0301
英文名称：X-Ray Cassette(12.7 cm×17.8 cm)
规格：一套
  T4多聚核苷酸激酶，是由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体，可以催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷间进行转移和交换，同时还具有3’磷酸酶活性，能将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。该T4多聚核苷酸激酶可用于寡核苷酸、DNA或RNA的5’末端标记或磷酸化；催化3’磷酸化的单核苷酸5’磷酸化以及去除3’端磷酸基团等。本品于75℃加热10分钟可使其失活，加入EDTA也可使其失活，金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50 mM的KCl和NaCl均可显著抑制其活性。

·抗GST标签琼脂糖介质
编号：WE0331
英文名称：Anti-GST Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin
规格：100μl|500μl
抗GST标签免疫亲和介质是将抗GST标签的单克隆抗体共价偶联到琼脂糖上，这种琼脂糖能进行免疫沉淀或者免疫共沉淀，能检测含有GST标签的蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成多肽序列
应用范围：IP


DNATrans转染试剂批发关键词：DNATrans Transfection Reagent,WE0255,DNATrans转染试剂


·快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)
编号：WE0152
英文名称：Fast TaqMan Mixture(Low ROX)
规格：5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase，能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，线性范围更宽。该产品适用范围广，可用于普通和快速定量PCR程序。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

组份	WE0151-5ml	WE0152-5ml	WE0153-5ml
2×Fast TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
建议采用两步法PCR反应程序，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 s
变性	95℃	5 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	30 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1-4分钟，以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


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·血液RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号：WE0197
英文名称：RNAtiqu Blood RNA Extraction Kit(DNase I)
规格：50次
  本试剂盒适用于从新鲜全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)中提取总RNA，可处理多至1.5ml的全血，洗脱得到分子量大于200 bp的高纯度RNA，多个样品可以在1小时内同时完成。本产品无需CsCl纯化的超离心步骤和LiCl或乙醇沉淀，不含有*酚或*仿等有毒溶剂，经过纯化的RNA有效去除血红素、肝素等酶抑制剂和污染物，可直接用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RBL(10×)	60ml
Buffer RL	35ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FL及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融，否则影响提取RNA提取得率和质量。样品在Buffer RL中，可于-70℃保存一个月。
3、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀，可置于于56℃水浴重新溶解。
6、本试剂盒不能用于加入抗凝剂的冷冻血液样本RNA的提取。
7、10×Buffer RBL需在使用前将溶液用无RNase的水进行10倍稀释，稀释后置于2～8℃保存。

操作步骤：
1、向新鲜的抗凝全血样本中，加入5倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍)，轻轻涡旋或颠倒混匀。冰上孵育10-15分钟，孵育过程中混匀两次。
注意：孵育过程中浑浊的悬液会变成透明，证明红细胞被裂解，必要时可以把孵育时间延长至20分钟。
2、4℃ 2,100 rpm(~400×g)离心10分钟，小心吸弃上清。
3、向以上沉淀中加入2倍血液样本体积的1×Buffer RBL(请于使用前用无RNase水将10×Buffer RBL稀释10倍)，轻轻涡旋，充分重悬沉淀。
4、4℃ 2,100 rpm离心10分钟，小心并彻底吸弃上清。
注意：此步一定要完全去除上清否则影响裂解导致RNA产量下降。
5、向沉淀中加入Buffer RL(使用前检查是否已经加入β-巯基乙醇)，具体加量按照下表进行，涡旋混匀。
注意：如果血液不是健康人的全血，需要根据血液中白细胞的数量来确定所需Buffer RL的加入量。完全混匀后细胞应完全裂解，块状沉淀消失。

Buffer RL(μl)	健康人类全血(ml)	白细胞数量
350	小于0.5	多至2×106
600	0.5-1.5	2×106 至1×107

6、将以上所得液体转移到已装入收集管的过滤柱中，12000rpm(~～13400×g)离心2分钟，收集滤液，弃掉过滤柱。
7、向滤液中加入1倍体积(600μl或350μl)的70%乙醇(无RNase水配制)，混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，不会影响后续实验。
8、将上步所得溶液全部加入到吸附柱中(已装入收集管)，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
11、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
12、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
13、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
14、重复步骤13。
15、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
16、将吸附柱置于一个新的RNase-Free的1.5ml离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water再次洗脱，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。

储存条件：室温(15～30℃)。

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