- ￥2250
- 正旦国际
- ZDK-006Z
- 北京
- 2025年07月14日
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- 保质期：
6个月
- 供应商：
正旦国际
- 英文名：
Telomerase Assay Kit
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-20℃
- 库存：
大量
- 规格：
20T
端粒酶活性检测试剂盒
规格：20T
该产品由军事医学科学院研发监制
一、试剂组成1. 裂解液(lys) 2×1.0 ml
2. TRAP混合物(TRAP-mix) 1×0.6ml
3. 酶(E) 1×8μl
4. 引物R(R-primer) 1×8μl
5. 阳性对照(control) 1×10μl
二、方法
1．取细胞105 _ 106(组织50mg,匀浆或液氮冷冻捣碎)，立即加裂解液100μl混匀，冰浴30min,4℃，16000g离心30min，取上清。
2．在反应管中依次加入以下组份:TRAP-mix 25μl；E 0.4μl；提取液 1μl(提取液蛋白浓度0.5~0.8μg/μl)；混匀，30℃保温30min。
3. 在反应管中加入R-primer 0.4μl,混匀，加20μl石蜡油，按以下条件进行PCR扩增：变性94℃/30s；退火55℃/30s；延伸72℃/30s；循环30 次。
三、结果分析
在反应管中加5μl 6×上样缓冲液，混匀，取30μl上样于12%聚丙烯酰胺凝胶，1×TBE条件下电泳，银染，出现间隔6bp梯形条带者为阳性。
四、银染方法
1．将凝胶用5倍凝胶体积的固定液(10%乙醇和0.5%乙酸)浸没，充分振荡3分钟。
2．向固定液中加入硝酸银溶液至终浓度为0.2%，振荡染色5-10分钟。
3．将凝胶用超纯水振荡洗涤2~3次，每次30秒，倾干水份。
4．将凝胶转移到5倍凝胶体积的显色液(含3.0%氢氧化钠和0.1%甲醛)中，振荡，直至所有条带出现，一般约需3~10分钟左右。
5．将显色凝胶转至新的固定液中再固定5分钟，制备干胶或照相保存。
五、注意事项
1．操作过程中避免RNase污染，阳性对照避免反复冻融。
2．最好设置一管阴性对照。
3．用于银染的水必须是超纯的或是经过玻璃装置重蒸的双蒸水。
4．避免交叉污染。
5．-20℃，至少稳定6个月。
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文献和实验问题。这 3 位美国科学家在端粒和端粒酶上的伟大发现，为 1980 年代后的细胞生物学打开了崭新的一页，特别是在老化以及癌症领域。2012 年，Maria Blasco 通过端粒酶技术，首次将实验动物寿命延长 24％。2015 年，Michael Fossel 致力于端粒酶疗法用于阿尔兹海默症临床试验的研究。这项研究发表在 2019 年，美国马里兰大学（UMD）和美国国立卫生研究院的一项新研究在《美国国家科学院院刊》（PNAS）杂志上对端粒酶的功能提出了新见解。这项新研究发现，端粒酶在正常成年细胞衰老过程中的
的PCR端粒酶活性检测试剂盒基于同样的的原理，利用银染技术检测端粒酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6bp 的梯状条带，条带的多、寡、深或浅表示端粒酶活性的大小。TRAP-银染法保留了传统TRAP 法灵敏度高、特异性强等优点，避免了同位素的放射污染。同时，还增设了内标准物，提供阳性对照品，优化了引物设计，使PCR效果进一步提高，使之能够高灵敏的检测到细胞和组织提取物中端粒酶的活性。 TRAP-银染法端粒酶活性检测试剂实验方法 试剂盒组份 组分 50 次实验量
ouwenwang 问下：我知道罔崎片段上的引物是要切除的，那先导链复制时不是也需要RNA引物的么？复制完成后切除么？如果切除了岂不是新合成链的5端少了一小段？ ouwenwang 为什么我看课本上画的示意图的意思好像是先导链复制完了根本就不短啊，只说随从链复制完成后5端要短一些，要用端粒酶补齐的？ freecell 先导链的合成是从新链5'端连续聚合单核苷酸，模板的方向
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