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- 2025年12月29日
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上海达为科生物科技有限公司
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稳定细胞株的筛选
稳定细胞株的筛选 服务介绍
稳定细胞系是指将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。常用物理方法（电转）、化学方法（脂质体等）、生物方法（病毒）。
稳定细胞株的筛选 实验原理
外源基因在细胞中的表达可分为两大类，一类是瞬时表达，一类是稳定表达（又叫表达）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，虽然可以达到高水平的表达，但通常只持续几天。后者外源DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因。建立稳定细胞株，一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物对靶细胞进行筛选。常用的抗性标记基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin）。
实验流程：
1、载体构建（表达质粒载体、病毒载体）；
2、转染/感染；
3、目的蛋白初步检测；
4、抗生素筛选；
5、目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6、单克隆细胞株稳定性检测。
客户提供：培养好的细胞
公司提供：基本实验步骤、图片、数据分析结果和稳定表达细胞株
实验周期：大约3-4月左右，具体需要根据细胞实验内容而定。
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文献和实验用慢病毒筛选稳定细胞株，以G418筛选方法为例，筛选出稳定整合Neomycin抗性基因的细胞系。 A 、 G418 抗生素最优浓度筛选 每种细胞对抗生素的敏感性不同，因此，准备建立稳定细胞系之前，需要确定能够在10-14天杀死细胞的最佳浓度。 方法如下 ： 1、将细胞稀释到1000个细胞/mL，接种到24孔板，每孔1ml。 2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选。3、每隔3天跟换1次培养液，保持G418浓度不变。 4、选择出
Purification of GST fusion proteins in E.coli GSTSugden lab,McArdle Laboratory for Cancer Research,University of Wisconsin-Madison Medical SchoolScreen of GST-Fusion Protein Expression(pGEX system by Amersham: for check clones for expression
Purification of GST fusion proteins in E.coli GST Sugden lab,McArdle Laboratory for Cancer Research ,University of Wisconsin-Madison Medical School Screen of GST-Fusion Protein Expression (pGEX system by Amersham: for check clones
