siRNA对照是RNAi完整实验的重要组成部分,主要包括:转染对照、阳性对照、阴性对照、空白对照。对照产品将帮助科学家进行siRNA转染条件优化,验证基因沉默实验流程的准确性,对siRNA诱导的基因沉默效果进行特异性分析,保证RNAi实验的顺利完成。
转染对照:荧光标记无靶标 siRNA,借助荧光成像可有效检测siRNA 转染效率,可配合使用riboMONITOR®转染指示剂;
阳性对照:以内源基因(如GAPDH)或报告基因为靶标的siRNA,确认RNAi 实验操作的准确性;
阴性对照:验证siRNA 特异性可选择通用的阴性对照和scramble对照。
产品优势
1、阴性对照siRNA采用特殊设计,不靶向任何已知的人、小鼠、大鼠基因,无任何化学修饰,具有更低的脱靶效应;
2、阳性对照siRNA经特异性设计及实验验证,是专门针对内源性基因或报告基因而设计siRNA的;
3、转染对照siRNA采用Cy3荧光标记,无化学修饰,荧光强度高,具有良好的抗淬灭性能,尤其适合细胞实验中的转染效率检测,可用荧光显微镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪进行检测。
参考下表可帮助您确定哪种RNAi对照符合研究需求。
阴性对照
阴性对照分为两类,通用型阴性对照和Scramble阴性对照。
siR-Ribo™ Negative Control阴性对照就是通用型阴性对照,使用软件分析和实验验证,与人、小鼠、大鼠等物种的基因同源性更小,是一个通用性较强的阴性对照,正式实验统计中常用该对照进行siRNA沉默效率计算。
图1 A549细胞系转染50nM p65 siRNA, siR-Ribo™ Ncontrol, Mock control, Blank control.
在转染后48小时后检测p65基因的mRNA表达,Ncontrol对细胞基本没有影响
Scramble阴性对照通常将相应的siRNA靶序列随机打乱并重新组合,使得其与靶序列的同源性较低,一般仅适用于该实验的阴性对照,需定制。
阳性对照
针对内源性基因或报告基因设计的阳性对照siRNA,用于确认RNAi实验的可行性。
图2 siR-Ribo™ Positive Control (h-ACTB)阳性对照siRNA沉默效率 以50nM终浓度转染A549细胞系48小时后,采用qPCR方法检测ACTB的RNA表达水平显著降低。
图3 siR-Ribo™ Positive Control (h-GAPD)阳性对照siRNA沉默效率 以50nM终浓度转染A549细胞系48小时后,采用qPCR方法检测GAPD的RNA表达水平显著降低。
转染对照
转染对照siRNA是荧光标记的无靶标siRNA,借助荧光成像系统可有效检测siRNA转染效率。
图4 siR-Ribo™ Transfection Control (Cy3)转染A549细胞6h后检测结果(200x荧光显微镜)
A:转染对照siRNA; B:Hoechst; C:Overlay
图5 siR-Ribo™Transfection Control (Cy3)转染Hela细胞12h后检测结果(激光共聚焦显微镜)
A:转染对照siRNA; B:Hoechst; C:Overlay