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上海博湖
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45
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贴壁/悬浮
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- 运输方式:
常温运输/干冰运输
- 器官来源:
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- 细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
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人/小鼠/大鼠/其他
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细胞描述
小鼠主动脉平滑肌细胞产品描述:小鼠主动脉平滑肌细胞分离自正常小鼠主动脉平滑肌,呈单层扁平分布。平滑肌即无纹肌的通称。被视为较横纹肌原始的一种肌肉。平滑肌除作为无脊椎动物的躯体肌而有广泛分布外,在脊椎动物除心肌之外而大部分内脏肌也是由平滑肌组成的。虽有如斧足类的闭壳肌和足系牵引肌等是由平行走向长纤维状细胞(平滑肌纤维)所构成,但多数的平滑肌则是由长纺锤形(脊椎动物的内脏肌长不到1毫米)的单核细胞构成。公司提供的小鼠主动脉平滑肌细胞,均来自新鲜组织。细胞的培养采用公司专利产品小鼠主动脉平滑肌细胞培养试剂盒(MouseAortaPrimaCell:NormalAorticSmoothMuscleCellsCatNo.3-4183)来优化目的细胞生长条件,以降低杂细胞(如脂肪细胞、纤维细胞等)的污染,同时保证质量的稳定。在公司技术部标准的操作流程下,小鼠主动脉平滑肌细胞可以保持原代细胞的分化状态,进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
发货:客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。公司提供的细胞有标准的鉴定流程,保证细胞的纯度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右完全培养基;2、说明书及注意事项;3、公司技售后服务标准。
保存和应用:客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞,如是新鲜原代细胞,客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。如是冻存细胞,客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
细胞传代:
小鼠主动脉平滑肌细胞1. 显微镜下观察细胞,神经干细胞悬浮成“神经球”生长,通常情况下,每两天换液一次,每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中,将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟,收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶,在超净工作台中轻轻吹打10次,注意不要消化太久,消化的目的是缩小神经球的体积,不要消化能单个神经干细胞,那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基,吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后,去掉上清,用新鲜培养基重悬细胞,按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏:
1. 小鼠主动脉平滑肌细胞 取出冻存管后,投入37℃水浴中,震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心(1000rpm,5 min)。
4. 弃去上清,再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基,转入培养瓶中培养。
细胞冻存:液氮冻存(冻存液:DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO)。
细胞运输:干冰运输(冻存管)/ 常温运输(T-25培养瓶)
细胞鉴定:神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态,放大倍数为200x,右图为nestin染色后的荧光图片(绿色),放大倍数为200x。
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L(-)-二苯甲酰酒石酸一水(>98%,BR)L-(-)DBTA, Dibenzoyl-L-tartaric acid, monohydrate质量规格:>98%,BR
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溴夫定(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Brivudine
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米托蒽醌质量规格:HPLC>97%,BRMitoxantrone
拉莫三嗪 质量规格:>98%,BRLamotrigine
小鼠主动脉平滑肌细胞悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮,因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换;而是每 2 到 3 天加料一次,直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞,然后继续培养扩增,或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞,将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。
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文献和实验钝性分离胸腺暴露主动脉弓及分支,把主动脉弓、头臂干及左颈总动脉之间筋膜撕开小口,用穿线器穿线。结扎缩窄主动脉弓,其原理是将升主动脉或腹主动脉与24留置针头捆绑在一起造成主动脉狭窄。主动脉弓缩窄是一个慢性心室肥大的最为常用疾病模型,可用于模拟高血压或室内压增高而引起的肥厚性心肌病。此类方法制作心衰模型对技术要求比较高,操作时应当注意,不要破坏动脉血管,容易引起大出血导致造模失败。
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